Notch1通路活化抑制EC109细胞的增殖及机制探讨

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1、中国癌症杂志2o09年第19卷第8期CHINA0NC0L0GY2009Vo1．19No．8597Notch1通路活化抑制EC1O9细胞的增殖及机制探讨[摘要]背景与目的：Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(humanpap订1omavirus，HPV)早期蛋白E口E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖。人食管鳞状细胞癌细胞系EClog细胞为HPV18阳性细胞。本研究将Notch1胞内段(intrace11u1ardomainofNotch，ICN)转入EC1Og细胞，导致EC1og细胞中Notc

2、h通路的组成性活化，从而探讨Notch通路活化与Ec109细胞增殖的关系及机制。方法：用脂质体转染法将ICN转入体外培养的Ec1O9细胞，用MTT法检测细胞增殖率；用流式细胞仪检测细胞周期；用RT—PcR检测HPV18E7基因的表达；用western印迹法检测周期蛋白激酶抑制因子p53的表达。结果：IcN转染入Ec1O9细胞后，Ec109细胞增殖受抑；细胞周期阻滞在G／M期，转目的基因组G。／M期细胞所占比例[(42．57±1．57)％]与未转染组[(1．88±O．66)％]及转空质粒组[(1．99±1．O2)％]相

3、比差异均有显著性(P<0．01)。67基因表达降低；p53表达升高，转IcN组(2．15±0．23)与未转染组(O．45±O．O7)及转空质粒组(0．46±O．O2)相比差异均有显著性(P

4、(2o09)O8—0597—05ActjvatedNotch1signaljnginhjbitsgrowthofEC1O9celllineanditsmechanismZJ力一1i。zHANGKe—jie．MINXiang—hui．LUQuan—yi．LIUwen—li(DepartmentofEmergencyandHematology。zhongShanHoSpita1．XiamenUniversity。FujianMedica1UniversityC1inicTeachingHoSpita1．XiamenFuj

5、ian361oo4，China)C0rreSpondencet0：ZHANGKe—jieE—mail：zhangkejieo378氇sina．com[Abstract]Backgr0undandpurp0se：IthasbeenreponedthatactiVationofNotch1couldstrong1yinhibitpro1iferationofHPV(humanpapillomavirus)一positiVeHeLacel1sbydown—regulatjonofmeand7genes．Theaimofth

6、isp印erwastoinvestigatetheroleoftheNOtchsignalingpathwayingr0wtharrestofEC109cel1sV移andthemolecularmechanism．Meth0ds：EC109cel11inesawel1dia'eremiatedhumanESCC(esophagea1squamousceUcarcinoma)ceUlinewithHPV18-positive，wasusedinthestudy．Exogenousimracellu1ardomaino

7、fNotch1(ICN)wastransfectedimocu1turedEC1O9cellsbvlipofectaminetransfection，mepro1iferationofthetransfectedcel1swasmeasuredbyanMTTassaCellcyc1edis仃ibutionwasanalyzedbyflowcytometry．Humanpapil1omaVimstype18(HPVl8)E7mRNAexpressionwasdetectedby王uPCR，andp53proteinex

8、pressionwasdetectedbywestemb1ot．Results：Activation0fNotch1signa1ingresultedininhibitionofEC109cellproliferationwiththeinductionofG2／Marrest．Therewasasigni矗cantdiflferenceint