蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建_史元敏

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1、新疆农业科学2012，49(8):1408－1413XinjiangAgriculturalSciencesdoi:10．6048/j．issn．1001－4330．2012．08．006蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建史元敏，何天明，袁海英(新疆农业大学林学与园艺学院，乌鲁木齐830052)摘要:【目的】构建蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体。【方法】以英格尔蟠桃为材料，将CTAB改良法提取的蟠桃总RNA反转录成cDNA作为模板，通过RT－PCR扩增约347bp的保守片段，将目标片段插入到pSK－int中间

2、表达载体中，获得pSK－PLD－RNAi中间表达载体，然后将其转入植物双元表达载体pCAMBI1301中，构建该基因的shRNAi表达载体pCAMBIA－PLD－RNAi。【结果】经限制性内切酶酶切和测序鉴定证明蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体pCAMBIA－PLD－RNAi已构建成功。【结论】蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体的构建为进一步通过RNAi技术延长蟠桃果实的贮藏寿命奠定了基础。关键词:蟠桃;磷脂酶D;RNA干扰;载体构建+中图分类号:S662.1;S188.3文献标识码:A文章编号:1001－43

3、30(2012)08－1408－06ConstructionofPhospholipaseDRNAiVectorofFlatPeachFruitSHIYuan－min，HETian－ming，YUANHai－ying(CollegeofForestryandHorticulture，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China)Abstract:【Objective】TheresearchaimstoconstructPhospholipaseDRNAinte

4、rference(PLDRNAi)vectorofflatpeachfruit．【Method】ThetotalRNAwasextractedfromflatpeachfruitsbyimprovedCTABmethodandreversetranscriptiontoobtainthefirststrandcDNA．ThiscDNAwasusedasatemplate，theconservedfragmentsabout347bpwereamplifiedbyRT－PCR．pSK－PLD－RNAiexpress

5、ionvectorwasobtainedbyinsertingthe347bpconserved－fragmentofphospholipaseD(PLD)intothepSK－intexpressionvector．ThePLDshRNAexpressionvectorpCAMBIA－PLD－RNAiwasconstructedthroughinsertingpSK－intexpressionvectorintopCAMBI1301vector．【Result】ThePLDRNAivectorpCAMBIA－P

6、LD－RNAiwassuccessfullyconstructedbyconfirmationofrestrictionendonucleasedigestionandsequencing．【Conclusion】TheconstructionofPLDRNAivectorprovidesthepossibilityofusingRNAitechniquetoimprovethestoragelifeofflatpeachfruit．Keywords:FlatPeach;PhospholipaseD;RNAint

7、erference;vectorconstruction0引言【研究意义】英格尔蟠桃(PrunuspersicaL．Bastchcv．‘Yingger’)，原名苏联大蟠桃，是在新疆北疆地区种植的品质优良、风味可口的中晚熟品种，果实肉质细腻、甘甜可口、味道鲜美，富含多种营养成分，是一种经济价值很高的木本果树。蟠桃是典型的跃变型果实，采收后极易腐烂变质，耐贮性差，货架期收稿日期:2012－03－12基金项目:国家自然科学基金(30860171);霍英东教育基金项目(121109)作者简介:史元敏(1987－)，女，硕

8、士研究生，研究方向为果树分子生物学，(E－mail)shiym103@163．com通讯作者:袁海英(1974－)，女，副教授，博士，研究方向为果实生理及生物技术，(E－mail)haiyingyuan@126．com8期史元敏等:蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建1409短，上市集中，不利于远距离运输，导致远销商品率低，其果实采后难以保鲜是生产实践中亟待解决的一［1～