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《蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建_史元敏》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、新疆农业科学2012,49(8):1408-1413XinjiangAgriculturalSciencesdoi:10.6048/j.issn.1001-4330.2012.08.006蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建史元敏,何天明,袁海英(新疆农业大学林学与园艺学院,乌鲁木齐830052)摘要:【目的】构建蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体。【方法】以英格尔蟠桃为材料,将CTAB改良法提取的蟠桃总RNA反转录成cDNA作为模板,通过RT-PCR扩增约347bp的保守片段,将目标片段插入到pSK-int中间
2、表达载体中,获得pSK-PLD-RNAi中间表达载体,然后将其转入植物双元表达载体pCAMBI1301中,构建该基因的shRNAi表达载体pCAMBIA-PLD-RNAi。【结果】经限制性内切酶酶切和测序鉴定证明蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体pCAMBIA-PLD-RNAi已构建成功。【结论】蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体的构建为进一步通过RNAi技术延长蟠桃果实的贮藏寿命奠定了基础。关键词:蟠桃;磷脂酶D;RNA干扰;载体构建+中图分类号:S662.1;S188.3文献标识码:A文章编号:1001-43
3、30(2012)08-1408-06ConstructionofPhospholipaseDRNAiVectorofFlatPeachFruitSHIYuan-min,HETian-ming,YUANHai-ying(CollegeofForestryandHorticulture,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052,China)Abstract:【Objective】TheresearchaimstoconstructPhospholipaseDRNAinte
4、rference(PLDRNAi)vectorofflatpeachfruit.【Method】ThetotalRNAwasextractedfromflatpeachfruitsbyimprovedCTABmethodandreversetranscriptiontoobtainthefirststrandcDNA.ThiscDNAwasusedasatemplate,theconservedfragmentsabout347bpwereamplifiedbyRT-PCR.pSK-PLD-RNAiexpress
5、ionvectorwasobtainedbyinsertingthe347bpconserved-fragmentofphospholipaseD(PLD)intothepSK-intexpressionvector.ThePLDshRNAexpressionvectorpCAMBIA-PLD-RNAiwasconstructedthroughinsertingpSK-intexpressionvectorintopCAMBI1301vector.【Result】ThePLDRNAivectorpCAMBIA-P
6、LD-RNAiwassuccessfullyconstructedbyconfirmationofrestrictionendonucleasedigestionandsequencing.【Conclusion】TheconstructionofPLDRNAivectorprovidesthepossibilityofusingRNAitechniquetoimprovethestoragelifeofflatpeachfruit.Keywords:FlatPeach;PhospholipaseD;RNAint
7、erference;vectorconstruction0引言【研究意义】英格尔蟠桃(PrunuspersicaL.Bastchcv.‘Yingger’),原名苏联大蟠桃,是在新疆北疆地区种植的品质优良、风味可口的中晚熟品种,果实肉质细腻、甘甜可口、味道鲜美,富含多种营养成分,是一种经济价值很高的木本果树。蟠桃是典型的跃变型果实,采收后极易腐烂变质,耐贮性差,货架期收稿日期:2012-03-12基金项目:国家自然科学基金(30860171);霍英东教育基金项目(121109)作者简介:史元敏(1987-),女,硕
8、士研究生,研究方向为果树分子生物学,(E-mail)shiym103@163.com通讯作者:袁海英(1974-),女,副教授,博士,研究方向为果实生理及生物技术,(E-mail)haiyingyuan@126.com8期史元敏等:蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建1409短,上市集中,不利于远距离运输,导致远销商品率低,其果实采后难以保鲜是生产实践中亟待解决的一[1~
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