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《牛血清白蛋白的共振光散射光谱法测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第24卷第6期分析科学学报2008年12月Vol.24No.6JOURNALOFANALYTICALSCIENCEDec.2008文章编号:100626144(2008)0620685204牛血清白蛋白的共振光散射光谱法测定3牧丹,吴立航,高德江,孙滟涛,邓新煜,田媛,张寒琦(吉林大学化学学院,长春130012)摘要:通过测量β2巯基乙醇(β2ME)2十二烷基苯磺酸钠(SDBS)2牛血清白蛋白(BSA)体系的共振光散射强度,建立了一种测定BSA的快速、简便的共振光散射光谱法。考察了pH值、β2ME和SDBS的浓度、试剂的加入顺序等因素对共振光散射强度
2、的影响。-1实验结果表明,在pH值为2.4,β2ME的浓度为0.71mol·L,SDBS的浓度为6.5×-4-1-8-7-110mol·L条件下,测定BSA的线性范围为1.0×10～7.0×10mol·L,检出-9-1限为6.0×10mol·L。将该法应用到合成样品中BSA及人血清样品中总蛋白的测定,所得结果与传统的考马斯亮蓝法的测定结果基本一致。关键词:共振光散射光谱法;牛血清白蛋白;β2巯基乙醇;十二烷基苯磺酸钠中图分类号:O657.39文献标识码:A蛋白质是人们认识细胞功能和疾病过程的关键,是生命科学的基础。蛋白质含量的测定在临床医学、生命科学
3、的研究方面有着十分重要的意义。蛋白质含量的测量方法很多,常用的经典方法有定氮法、双缩[1]脲法(Biuret法)、Folin2酚试剂法(Lowry法)、考马斯亮蓝法(Bradford法)等。共振光散射光谱法是近几年发展起来的一种新的分析技术。该方法简单,灵敏度高,可以用普通的荧[2][3]光分光光度计测量,因此在蛋白质和核酸等生物大分子的研究中得到了广泛的应用。自从1993年Pasternack等人首次用共振光散射(RLS)技术研究了卟啉类化合物在核酸上的聚集,从而将该技术应用[4][5]于分析测定以来,共振光散射技术得到了迅速发展。黄承志等人利用卟
4、啉在蛋白质或核酸上聚合组装时产生的共振光散射强度与生物大分子浓度间的线性关系,建立了共振光散射技术定量测定生物大分子的新方法。对于阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)和蛋白质体系的共振光散射光谱的研究已有报[6,7]道。本文在此基础上研究了还原剂β2巯基乙醇(β2ME)对牛血清白蛋白(BSA)2SDBS体系共振光散射强度的影响。结果证明使用β2ME可提高信号强度和方法的灵敏度。1实验部分1.1仪器与试剂RF25301PC型荧光分光光度计(日本,岛津公司);GBCCintra10e型紫外2可见分光光度计(澳大利亚,GBC仪器公司);DELTA3
5、20型pH计(上海梅特勒2托利多仪器有限公司)。-5-11.1×10mol·LBSA(购自上海生物制品有限公司)储备液用二次去离子水配制,并在4℃下保-1存。0.01mol·LSDBS(购自天津市光复精细化工研究所)储备液用二次去离子水配制备用。β2ME购自-1-1北京鼎国生物试剂有限公司。用不同比例的0.2mol·L磷酸氢二钠溶液以及0.1mol·L柠檬酸溶液控制反应体系的酸度,其它试剂均为分析纯。1.2实验方法在10mL比色管中依次加入适量的BSA溶液、缓冲溶液和β2ME溶液后振荡混匀,再加入适量的收稿日期:2007212218修回日期:2008
6、2042213通讯联系人:田媛,女,副教授,主要从事光谱化学分析研究.685第6期牧丹等:牛血清白蛋白的共振光散射光谱法测定第24卷SDBS溶液,最后用二次去离子水定容,放置10min后进行测定。采用RF25301PC荧光分光光度计,在220～800nm波长范围内同步扫描(λex=λem),激发和发射狭缝均为3nm。在最大共振光散射波长处测0量样品液(BSA2β2ME2SDBS)的共振光散射强度IRLS和空白(β2ME2SDBS)的共振光散射强度IRLS,由测得00的IRLS和IRLS,可得到增强的共振光散射强度△IRLS,即△IRLS=IRLS-I
7、RLS。2结果与讨论2.1BSA、β2ME及SDBS的共振光散射光谱-7由图1可知,在pH=2.4,[BSA]=4.5×10mol-1-1-4·L,[β2ME]=0.71mol·L和[SDBS]=6.5×10-1mol·L的条件下,BSA、β2ME、SDBS、BSA2β2ME和β2ME2SDBS体系的共振光散射强度较弱,而BSA2SDBS和BSA2β2ME2SDBS体系在357nm和545nm波长处的共振光散射强度较强。由于357nm处的共振光散射强度比545nm处的更强,因此本文选择357nm作为测定波长。2.2实验条件的优化图1不同体系的共振光散
8、射光谱2.2.1酸度的影响BSA和SDBS是通过静电作用Fig.1TheRLSspectraofvariou
