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《植物亚细胞定位载体卡盒pCEG的构建及验证》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第42卷第4期东北农业大学学报42(4):83~872011年4月JournalofNortheastAgriculturalUniversityApril2011植物亚细胞定位载体卡盒pCEG的构建及验证朱丹，王希，朱延明*，陈超，李勇，柏锡，才华，纪巍（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）摘要：GFP基因被广泛地应用于植物转基因以及基因功能验证研究，然而构建与GFP融合的植物表达载体，常会因酶切位点难以选择，而使得载体构建过程复杂，周期长。以含GFP的质粒pCAMBIA-1302为基础，消除此质粒本身
2、的多克隆位点（MCS），并在此质粒GFP基因序列前插入原核表达载体pET-32b的多克隆位点，构建了植物GFP亚细胞定位载体卡盒pCEG；采用农杆菌介导的转化方法，将此载体卡盒pCEG导入模式植物烟草叶片中进行瞬时表达，用激光共聚焦显微镜观察GFP蛋白的亚细胞定位情况，发现GFP蛋白均匀的在细胞质和细胞核中表达，证明此载体卡盒可用于植物基因的亚细胞定位分析，并为构建目的基因与GFP融合的植物表达载体提供了很多可用的酶切位点，对植物基因功能验证提供了分子操作简便的植物表达载体卡盒，具有重要的利用价值。关键词：载体卡盒
3、构建；亚细胞定位；GFP；烟草中图分类号：Q782文献标志码：A文章编号：1005-9369（2011）04-0083-05ConstructionandapplicationofaplantsubcellularlocalizationvectorboxofpCEG/ZHUDan,WANGXi,ZHUYanming,CHENChao,LIYong,BAIXi,CAIHua,JIWei(CollegeofLifeSciences,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin15003
4、0,China)Abstract:GFPgenewaswidelyappliedinthetransgenicplantsandgenesfunction'sprovingstudy.However,theconstructionofGFPfusedplantexpressionvectorswasalwayscomplicatedandtimeconsumingduetothehardchooseofrestrictionenzymecuttingsites.UseplasmidpCAMBIA-1302which
5、includedGFPgeneasaoriginalvector,andeliminateditsownmultipleclonesite(MCS),andtheninsertedpET-32b'smultipleclonesiteinfrontofGFPgenesequences,namedtheeventualplantGFPsubcellularlocalizationvectorboxpCEG.ByAgrobacterium-mediatedtransformationmethod,pCEGinstanta
6、neousexpressedintobaccoleaves,andGFPproteinsubcellularlocalizationwasobservedbylaserconfocalmicroscope.TheresultdisplayedthattheGFPproteinsexpressedinbothcytoplasmandnucleus,thismeansthepCEGboxcanbeusedconvenientlyforplantgenessubcellularlocalizationanalysisan
7、dprovidealotofusablerestrictionenzymecuttingsiteforplantgenesfusionedwithGFP,andthepCEGboxisconvenientforplantgenesfunctionanalysisandhasgreatusevalue.Keywords:constructionofvectorbox;subcellularlocalization;GFP;tobacco在基因的功能研究过程中，外源重组基因表达中的亚细胞定位，对研究外源重组基因表达产物
8、的产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关功能或未知新基因的功能来说具有很重要的意系，特别是对于真核细胞，蛋白质位于不同的细胞义。目前被广泛应用的能进行亚细胞定位的报告基部位所行使的功能也不同，所以研究其在宿主细胞因主要是绿色荧光蛋白（Greenfluorescentprotein，收稿日期：2011-01-12基金项目：国家高科技发展计划（863计划）（
