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1、,15,《国外医药抗生素分册》11(3)8一16?1990’’’’’’州一~~一~‘一~~·飞{综述和译文{..卜...毛二~~~~~~~_石链霉菌的大型线性质粒和抗生素产生。HnashKii。虽然人们认为质粒参与链霉菌产生抗生先成功地分离了大型线性DNA这种方法,,素的遗传控制但除了紫红链霉菌SANK通常称之为脉冲电场凝胶电泳(PFGE)它。。5570的pSVI外,能分离10一50ookb范围的DNA接着作了尚未检测到含有结构基因。一些修改,例如,相互垂直交变电场凝胶电和/或调节基因的质粒特别是天蓝色链霉,,,菌A3‘2)的SCFI质粒通过遗传和克隆的泳(OFAGE)电场换流凝
2、胶电泳(FIGE)。“。nur一“e研究揭示次甲基霉素生物合成(mmy)及其和场lampd均匀电场(CHEF)啤,抗性(mmr)基因在SCPI上形成一个至少有酒酵母染色体几噬菌体DNA阶梯和Hindl17kb的基因簇,消化的F和常规琼从而证明它控制着次甲基霉只噬菌体DNA分别由CHE。,,HEF的优越素产生尽管有这些累积的资料还是没有脂糖凝胶电泳分析结果表明C。。,检测到SCPI本身一个被普遍接受的想法性胜过常规方法在常规凝胶上只有刀,Hind工片段被分离,,是这个共价闭环(CCC)DNA质粒可能太大而在CHEF凝胶上较。小的酵母染色体和兄噬菌休DNA阶梯也被分以至于不能将它以其
3、完整形式分离出来没。有考虑到会牵涉到大型线性DNA质粒的问离现在我们一般使用OFAGE和CHEF两,,,DNA大小,CH,题因为它和染色体DNA的分离直到现种方法对比较EF更好些。:。在没有成功这方面的困难有两个原因1)这是因为它的线性电泳轨迹几何学另一方这种涟霉菌环形染色体DNA是那么大(1.05面,OFAGE显示一种曲线轨迹几何学,有4,,xIOkb)以至在通常的抽提过程中会降解时难以比较准确的大小F工GE在某些分子。。形成线性DNA片段2)超过3Okb大小的线性范围DNA的凝胶上有反向迁移的问题,DNA在常规琼脂糖凝胶电泳中共同迁移而当在溶液内的通常DNA制备过程中大。,“
4、”。,DNA对物理剪切很敏感hwa1’tz产生染色体DNA带在这种情况下我们所以Sca首先应用垂直交变电场凝胶电泳(OFAGE)与Cntol*把酵母细胞包埋在低胶化温度琼,(Zase以及对链霉菌DNA在琼脂糖凝胶中作温和脂糖凝胶中在原位通过酶ymol)处,的,理制备原生质休然后加入蛋白酶K和SDSDNA制备从推测抗生素产生由质粒所。决定的总共六个产抗生素菌株中发现了大型溶液来裂解不过这种方法不能直接应用于,。线性质粒(。o一。50kb、链霉菌因为链霉菌原生质体的裂解会产生,干扰许多细胞碎屑OFAGE凝胶上DNA、一脉冲电场凝胶电泳(PFGE)。,的分离所以我们在溶液中制备原生质体
5、再经玻璃纤维过滤除去碎屑,不能用只有一个电场的常规琼脂糖凝胶包埋于琼脂糖。,onase电泳法来分离大型线性DNAschwartz与凝胶中用链霉蛋白酶(Pr)E与SDS。,Cantor以,处理我们用链霉蛋白酶E代替蛋白酶K两个近似垂直电场的交替使用首159,。这样在以OFAGE分离DNA时没有问题即产拉沙里菌素之间的任何关系只有一个例,pKSL使用苯甲基磺酞氟处理后在凝胶中用酶消外表明和产棘霉素之间有相当密切的,。。化也不会有问题产生已报道DNA制备和关系现在我们正在进一步研究pKSL在拉。。OFAGE的细节沙里链霉菌中的作用、、二拉沙里链霉菌中pKSL的发现三其它抗生索产生菌中的
6、大型线性质粒在我们对拉沙里链霉菌的拉沙里菌素生,uv3一rif(an物合成研究中发现产生菌13抗利自从Ok始hi等首先提出质粒可能参,as+e+e一”rs,福平营养缺陷型LEhNiRifSt)与抗生素的产生之后就十分努力地用常规Z一as-,Cs一Er和不产素的链霉素抗性株PR45(L琼脂搪凝胶电泳CItB超离心和电镜。,Eeh一Ne十srrpSV工iRifst)原生质体融合引起产拉寻找链霉菌质粒然而除了外还没沙里菌素as+Ec五+和棘霉素(L表型)能力从有发现含有抗生素产生的结构和/或调节基。。UV3一13r汀到PRZ一45的高频转移虽然由此因的质粒pKSL质粒的发现猜想在那些尽
7、,sCI一Er,推测有可转移因子参与但通过CtB管遗传资料支持有质粒存在却检测不出质,。超离心和常规琼脂糖凝胶电泳却没有能看粒来的菌株中有大型线性质粒的参与因。,,到任何质粒所以为了检测质粒我们把此我们用OFAGE技术检查链霉菌大型线性OFAGE应用于链霉菌DNA,。在拉沙里质粒的存在在12株试验过的产抗生素链霉NRRL,as今,6链霉菌3382R(野生型菌株L菌中在以下个菌株中发现了大型线性质e斗Ne+srs,。EhiRifst)中发现了一个大型线性粒如表一所示。r,质粒pKS
