质粒在大肠杆菌和链霉菌和FR-008之间的属间接合转移①

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1、遗传HEREDITAS(Beijing)16(6):7-101994质粒在大肠杆菌和链霉菌)FR-008之间的属间接合转移①邓子新周秀芬（华中农业大学微生物科学与技术系，武汉430070)摘要tIJ8154是由链枪菌一大肠杆菌双功能穿梭载体pGM160衍生而来的．本文报道这个质粒从携带RP4的大肠杆菌细胞中向革兰氏阳性细菌一链霉菌FR-008中的转移．从两种宿主中分别提取质粒DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，发现pIJ8154的结构在两种亲缘关系甚远的宿主中均是稳定的，这种接合转移的方法已经成为向链霉菌FR-008中转移基因的一种手段．关键词接合转移，质粒，链霉菌Interge

2、nericPlasmidConjugalTransferBetweenEscherichiacoliandStreptomycesFR-008DengZixinZhouXiufen(DepartmentofMicrobialSciencesandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070)长期以来，人们一直认为微生物质粒之间的接合转移只限于亲缘关系极其相近的两个种或属之间．最近，Trien-Cuot等人首次阐明一个G一大肠杆菌与许多G十细菌的穿梭质粒之间也可以进行质粒的接合转移（”，．为了使这种转移成功，质粒

3、必须既具备大肠杆菌．又具备G＋细菌的复制起始点（ori)，转移还依赖于转移起始点(oriT）的顺式作用和IncP群质粒如RP4转移基因（Ira）的反式作用．自此以后，许多研究者都构建了类似的穿梭质粒，证明这种转移可以发生在亲缘关系遥远的生物，如大肠杆菌与肠球菌、链球菌、苏云金杆菌、利斯特氏菌、葡萄球菌‘川、链霉菌（，，与棒杆菌〔的之间．最引人注目的还是将农杆菌质粒诱动到烟草植物细胞中以及穿梭质粒从大肠杆菌转移到啤酒酵母中（(3,5)．甚至有人阐明大肠杆菌的天然质粒RSF1010也可以通过接合而转移到链霉菌和分枝菌中并稳定遗传(4)．这里，我们以产生烯类抗生素的链霉菌FR-

4、008（‘〕为宿主，尝试了将大肠杆菌一链霉菌双功能质粒pIJ8154诱动转移到FR-008的方法，并阐述了这种技术的可行性和实用性．1材料和方法1.1菌株、质粒和培养条件本研究所用到的菌株和质粒列于表1．大肠杆菌的液体培养基为LB，培养温度为37D,FR-008的液体培养基为YEME或TSB(Z)，固体培养基为R2YE,30℃培养．收获抱子的方法见文献［[2l．在液体培养基中，链霉素(Sigma）和氨节青霉素(Bachetn）的使用浓度分别为30ug/ml和100ug/ml.诱动性质粒pPM927‘的限制性酶谱见文献[9].pIJ8154的酶谱见图1，它是由pGM160(

5、6)所衍生的，它与pGM160唯一差别是庆大霉素抗性基因（aacC1)所处的XbaI-HindI片段（(1.4kb)被携带RK2转移起始点（oriT)的Xbal-HindII片段（(0.7kb)所取代．①本项研究受到国家科委863青年科学基金和国家自然科学基金资助．8遗传HEREDITAS(Beijing)199416卷表I菌株和质粒菌株或质粒大小（kb)遗传标记一起源资料来源大肠杆菌ET12567dam-13::Tn9(cat),dcm-6T.Kieser（私人交流）大肠杆菌ET12567(RP4)同ET12567，但携带RP4(sir)M.Bibb（私人交流）链霉菌F

6、R-008吸水链霉菌应城变种种内融合子文献川tsr-远青链霉菌；bla-pBR322;oriT-RK2pIJ81546.9M.bibb（私人交流）（为大肠杆菌一链妞菌双功能质粒）tsr－远青链霉菌；str-pHP45fl;oriT-RK2pPM92711.6（为大肠杆菌一链霉菌双功能质粒）一文献191Sst11Nc吐】S81111＿Kpn川(Smal)]!BamHl,妇Sa江Xbal口｝sailKpnlHind班BcllPvull}orlTPstISslIpIJ8154'PSISa11-So为1blaR'/rPvullisrSa江RcoRVclalSsillISsilPv

7、u且EcoRl图1p1J8154的限制酶谱bla为氨节青霉素抗性基因；is。为硫链丝菌素抗性基因．1.2接合转移的方法将携带整合态质粒RN和各个诱动性质粒的ET12567的供体细胞接种在含有不同抗生素的LB培养基中，37℃培养过夜、用LB洗涤两次后，悬浮在Iml新鲜的LB中（细胞浓度约为101/ml)，作为受体的FR-008抱子用文献［[21所述方法进行热激和抱子预萌发处理后，悬浮在1ml(约109/ml)LB中．取经过上述处理的供受体细胞各O.lml于LA平板上棍合并涂布均匀，在30℃培养24小时，然后用LB培养基淹没平板，