毛细管电泳法测定紫草中的紫草素

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1、第34卷分析化学（FENXIHUAXUE）研究简报第7期2006年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry991～994毛细管电泳法测定紫草中的紫草素1#1123李全文陈缵光周勰潘爱华王立世123（中山大学药学院，广州510089）（中山大学基础医学院，广州510089）（华南理工大学，广州510640）摘要建立了毛细管电泳高频电导法测定紫草药材中左旋紫草素含量的分析方法。以融硅毛细管（150µm×70cm）为分离柱，研究了缓冲液的种类、浓度、添加剂种类与添加量、分离电压和进样量等因素对分离和检测的影响，优化

2、选择1.0mmol/LH3BO3+3.0mmol/L三乙胺缓冲液为电泳介质，分离电压18.0kV，可实现分离检测。在优化条件下左旋紫草素线性范围为10.0～250mg/L；线性相关系数为0.9962；检出限为5.0mg/L（S/N=3）。2批样品不同浓度添加水平的日内和日间RSD均小于4%，两批药材的加标回收率分别为93.9%～97.4%和93.1%～101%。该方法简便、快速、灵敏度高，可以用于紫草药材的质量控制。关键词毛细管电泳，高频电导检测，非接触式电导检测，紫草素，紫草1引言紫草为紫草科植物，有新疆紫草（Arnebiaeuchroma

3、（Royle）Johnst）、内蒙紫草（ArnebiaguttataBunge）之分，药用其干燥的根。此药具有凉血活血、解毒透疹之功，多用来治疗斑疹、麻疹、痈及外伤［1］［2，3］等。最近又发现其具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤以及抗HIV-1等药理作用。其主要有效成分为羟基萘醌类色素化合物，通常以左旋紫草素（shikonin）的含量为测定标准。文献报道紫草中左旋紫草素［4，5］［6～8］的含量测定常采用紫外分光光度法、薄层扫描法及高效液相色谱法（HLPC）等，其中紫外分光光度法常需配合一些辅助手段，过程复杂；薄层扫描法操作程序过多，影响因素不易消

4、除；HPLC分析时［9］间长、试剂成本高、样品处理较繁琐。本实验采用毛细管电泳高频电导检测装置，对紫草药材中左旋紫草素含量进行测定。由于检测电极不与溶液直接接触，能有效地消除分离电场对检测的干扰和电极中毒等问题，方法简便、快速、灵敏，样品处理简单，为紫草的质量评价提供了比较准确的定量方法。2实验部分2.1仪器与试剂［9］毛细管电泳高压电源（自制）；高频电导检测器（自制）；石英毛细管（150µm-id，河北永年锐沣色谱器件有限公司）；数据工作站（自制）；数据记录与处理在普通P4微机和PCL-711B型A/D卡（台湾EVOC）上完成；超声波提取器

5、（DA-3A，顺德乐从灵通电子厂）。左旋紫草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110769-200405）；新疆紫草药材（批号050428，050622）；三（羟甲基）氨基甲烷（Tris）（FarcaChemicalSupplies，G.R.级，香港分装）；其它试剂为国产分析纯。实验用水为去离子水经二次蒸馏。2.2对照品和供试品溶液的制备称取左旋紫草素对照品0.00500g，加适量乙醇溶解后定容于10mL容量瓶中，得浓度为0.500g/L对照品储备溶液，4℃保存，临用时稀释成各浓度的标准溶液。将干燥紫草药材用中药粉碎机粉碎，过30µm孔径

6、筛，精确称取紫草药材粉末0.5000g，置50mL锥形瓶中，加乙醇30mL，超声提取30min，振摇后静置冷却10min，双层滤纸过滤，滤渣加20mL乙醇，超声提取20min，合并乙醇滤液并用乙醇定容至50mL，置水浴蒸干，残渣用乙醇溶解并定容至10mL，用0.22µm微孔滤膜过滤后即得供试品溶液，精密吸取样品适量进样分析。2.3实验方法毛细管在使用前，分别用0.1mmol/LNaOH溶液和水各冲洗10min，再用H3BO3-三乙胺缓冲溶液2005-11-08收稿；2006-02-15接受本文系国家自然科学基金项目（No.20375049）和

7、广东省自然科学基金重点项目（No.021808）992分析化学第34卷洗20min。每次测定后，用运行缓冲溶液洗2min，以确保较好的重现性。采用重力虹吸方式进样，进样高度25.0cm，进样时间15.0s。检测器的信号经A/D卡转换，由数据工作站采集到微机进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在恒温（25℃）、恒湿（60%）条件下进行。高频电导检测器的电极间隙2.0mm，管状电极长度20mm，高频电压频率40.0kHz。3结果与讨论3.1缓冲溶液的选择电泳介质的组成及其pH值直接影响离子迁移速度。左旋紫草素的pKa值为7.59，原则上

8、pH=pKa±1的缓冲溶液可以作为候选的缓冲溶液。但是pH除控制电解质样品的有效淌度外，还控制电［10］渗，甚至是样品在管壁的吸附水平。所以，还是需要搜索和优化来选