LCMSMS测定食品中氯霉素含量测量不确定度评估

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1、LCMSMS测定食品中氯霉素含量测量不确定度评估1实验目的用液质联用仪测定可食动物肌肉、肝脏和水产品及其制品中氯霉素的含量2方法依据GB/T20756-2006可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法3方法原理及步骤提取①称取5g（±0.05g）试样，置于50ml离心管中；②加入15ml乙酸乙酯，0.45ml氢氧化铵，5g无水硫酸钠，均质提取30s，以3500rpm离心5min；③吸取上清液于250ml旋转蒸发瓶中；④在残渣中加入15ml乙酸乙酯，0.45ml氢氧化铵，用先前的均质刀头均质提取30s，以3500rpm离

2、心5min；⑤吸取上清液合并于250ml旋转蒸发瓶中；⑥再重复上述操作2次（共4次），合并全部全部上清至250ml旋转蒸发瓶中；⑦40℃旋转浓缩至干。净化①旋转蒸发瓶中的残渣用5ml水溶解，含有不溶物时，超声5min；②加入5ml正己烷，于漩涡混合器混合30s；③静置（或离心）分层，弃掉上层的正己烷；④再加入5ml正己烷漩涡混合30s，静置（或离心）分层，弃掉上层；⑤移取水层约3ml于5ml离心管中，以13000rpm离心5min；⑥0.20µm针头过滤器过滤后，供LC/MS/MS测定，外标法定量，检测结果使用回收率进行校正。4计算公式和数学模型食品中氯霉素的含量

3、按下述公式计算CV×X=mc×ReX—样品中氯霉素的含量，μg/kgC—样品最终测定的浓度，μg/kgV—旋转浓缩至干后溶解用水的体积，5mlm—称取试料的质量，10g第1页共6页Rec—与样品同时做三个添加回收实验，三个回收样的平均回收率。上述公式是从测定原理给出的。显然没有考虑各种随机因素对不确定度的影响，再次应引入反映各方面随机影响的重复性系数frep,其数值等于1。评定不确定度的数学模型应写成如下形式：CV×Xf=×repm×Rec5食品中氯霉素含量测量不确定度的来源重复性VC标准溶液读数标准浓度校准曲线X校准称量误差mRec6各分量标准不确定度的评估6.

4、1测量重复性标准不确定度本测量分三组观测了6份数据，所得结果如下表所示：平均平均回收回收率校12平均值测量标准偏差率正值值第一组（μg/kg)0.781.010.891.150.780.16第二组（μg/kg)0.410.540.470.760.620.790.09第三组（μg/kg)0.710.450.580.590.980.18多次测量的实验标准偏差按下式计算m12SSp=∑jmj=1第2页共6页其中m=3Sj为每组数值的标准偏差，计算得到Sp=0.15μg/kg在日常分析中，测量两份样品，报告平均值。两次测量结果的平均值的相对标准偏差为：Sp0.15uf(r

5、ep)===0.14c20.79×1.4146.2精制浓缩液定容后试验液浓度的标准不确定度6.2.1由标准曲线引起的不确定度标准曲线取5个浓度点，每个浓度点进样1次，结果如下：浓度（μg/kg)0.512510面积值230080402160066800136000标准曲线的方程为：y=14100c-5300试验液的浓度通过拟和标准曲线确定，由标准曲线引入的标准不确定度按下式计算：2sy()11()yy−sc()p=++nbpn22bC∑()i−Ci=1其中，p—试样平行测定次数n—拟和直线的数据对总数y—试样测量响应值（p个）的平均值y—绘制拟和直线响应值（n个）

6、的平均值Ci—绘制拟和直线输入值C—绘制拟和直线输入值Ci的平均值。Cp—试样测量预估值在本测量中，p=1，n=5，试样测量响应值y1=5690，利用拟和标准曲线计算得到试验液的浓度Cp=0.78μg/kg。把相关数据带入上述公式计算得到由标准曲线引入的标准不确定度：S（Cp）=0.126μg/kg。其相对标准不确定度为0.126uCrel()p==0.160.786.2.2配制标准溶液浓度的不确定度6.2.2.1标准溶液的配制方法1000μg/ml标准原液标准原液：使用分析天平（精确至0.1mg）正确称量10.0mg（＋0.2mg）（w）氯霉素标准品（纯度p为9

7、9%）于10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至10ml(L1)。标准溶液1（100ppm）：准确吸取标准原液1ml(l1)于10ml(L2)容量瓶中，用甲醇定容。标准溶液2（10ppm）：准确吸取标准溶液11ml(l2)于10ml(L3)容量瓶中，用甲醇定容。第3页共6页标准溶液3（1ppm）：准确吸取标准溶液21ml(l3)于10ml(L4)容量瓶中，用甲醇定容。标准溶液1、2、3于-20℃冷冻保存。可使用6个月。标准曲线用标准溶液：准确称取标准溶液3（1ppm）1ml于10ml(L5)容量瓶中，用水定容至10ml(L1)，配制成100ppb(l4)标准溶液。然后

8、依次用水递