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1、第24卷第3期北京农学院学报Vol.24,No.32009年7月JOURNALOFBEIJINGUNIVERSITYOFAGRICULTUREJul.,2009氯霉素全抗原的合成与鉴定*宋砚斋,杨柳,张淑萍,滑静(北京农学院生物技术系,北京102206)摘要:利用重氮化法合成氯霉素全抗原,将氯霉素的对位苯硝基构造成芳香氨基,并氧化使其与牛血清白蛋白偶联,构成氯霉素全抗原。此外,利用紫外光谱、红外光谱与酶联免疫等方法对合成的全抗原进行鉴定。结果表明,氯霉素全抗原合成成功,并免疫原性良好。其偶联比为1B01959,蛋白质浓度达21799mg/m
2、L。关键词:氯霉素;全抗原;重氮法;抗原决定簇;酶联免疫+中图分类号:S8591796文献标志码:A文章编号:1002-3186(2009)03-24-04SynthesisandIdentificationofChloramphenicolAntigen*SONGYan-zhai,YANGLiu,ZHANGShu-ping,HUAJing(DepartmentofBiotechnology,BeijingUniversityofAgriculture,Beijing102206,China)Abstract:Diazotizationis
3、adoptedtosynthesizethecompleteantigenofchloramphenicol(CAP)inthispa-per.Chloramphenicolwasreformedandthenwascoupledwithcarrierproteinbovineserumalbumin(BSA).Thecompleteantigenwasidentifiedbyultravioletspectrum,infraredspectrumandenzyme-linkedimmunosorbentassay.Resultsindic
4、atedthatsynthesisofCAPantigenwassuccessfulandithadimmuno-genicity.Thecouplingratiowas1B0.959andconcentrationofproteinwas2.799mg/mL.Keywords:chloramphenicol;antigen;diazonium;epitope;ELISA氯霉素是委内瑞拉链霉菌产生的一种广普抗生[1]-1材料与方法素,它对于G(革兰氏阴性菌)细菌的抵抗能力111材料与试剂较强。由于氯霉素的残留具有极为严重的副作用,氯霉素(C
5、AP)、牛血清白蛋白(BSA)购自北京它可引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症,长欣经科生物技术有限公司;卵清蛋白(OVA)、辣根期摄入会导致机体产生抗药性和引起体内微生物群过氧化物酶(HSR)购自sigma,HSR酶标羊抗兔抗落失衡。在国际上许多国家已经禁止在食品动物生体购自北京鼎国生物技术有限公司;抗氯霉素抗体[2]产中添加氯霉素,也规定其药物残留量。因此,探经免疫动物后通过饱和硫酸铵盐析再经过纤维素离究快速和准确的检测氯霉素残留手段十分必要,获子交换层析柱纯化提取自制;锌粉购自天津市天大得特异性较好的抗体,其关键在于合成具有高免疫华工
6、实验厂;氨基磺酸铵、盐酸、亚硝酸钠、无水乙[2-3]原性的氯霉素全抗原。很多研究表明,重氮化法醇、N,N-二甲基苯胺、氢氧化钠、弗氏完全佐剂得到的抗原可能是由于间隔臂太短而造成免疫原性(FCA)、弗氏不完全佐剂(FICA)均为国产分析纯;磷酸盐缓冲液(PB)pH7.2和pH7.4、碳酸盐缓冲液不强,动物免疫试验后甚至得不到抗体。该研究采(CB)PH9.4均为自制。用重氮化法合成氯霉素全抗原,并运用多种手段进TLL-C台氏高速冷冻离心机;TU-1800紫外光行检测,确定抗原的合成质量,为能得到高效价的抗谱仪;Nigaoli5700红外光谱仪;
7、Bio-admodel680体做基础。收稿日期:2009-04-01作者简介:宋砚斋(1985-),北京人,硕士研究生,研究方向:分子遗传学。*通讯作者:滑静,E-mail:huajing_z@yahoo1com1cn2009年第3期宋砚斋等:氯霉素全抗原的合成与鉴定25酶标仪;Bio-admodel1575洗板机等。在BSA的最大吸收峰的吸光值,A286抗原在BSA在1.2方法最大吸收峰的吸光值。C.1是CAP溶于0.01mol/1.2.1全抗原的合成LpH7.4的PBS中的浓度,一般为50Lg/mL,C.2[4][5]参照徐修远、王谦等
8、所报道的方法并加以是BSA溶于0.01mol/LpH7.4的PBS中的浓度,调整:(1)还原:取600mgCAP溶于7000LL无水一般为500Lg/mL。[2]乙醇中,用1mo
