资源描述：
《氯霉素全抗原的合成及鉴定_王雪》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2008年第1期氯霉素全抗原的合成及鉴定王雪1黄飚1,2金坚1屠蔷1(1江南大学医药学院,无锡214122;2江苏省原子医学研究所,无锡214063)摘要:为建立氯霉素的免疫分析方法,采用混合酸酐法和重氮化法,将半抗原氯霉素(CAP)与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原CAP-BSA和包被抗原CAP-OVA。以紫外扫描确定偶联率,并用酶联免疫(ELISA)的方法鉴定,确定偶联成功。经过比较,混合酸酐法优于重氮化法。关键词:氯霉素免疫原合成混合酸酐法重氮化法Synthesi
2、sandIdentificationofChloramphenicolImmunogen11,211WangXueHuangBiaoJinJianTuQiang(1SchoolofMedicine2,JiangnanUniversity,Wuxi214122;JiangsuInstituteofNuclearMedicine,Wuxi214063)Abstract:InordortoestablishtheimmunoassaymethodofChloramphenicol(CAP),CAPwascoupledwithcarrierproteinbovineser
3、umalbumin(BSA)andOvalbumin(OVA)topreparecompleteantigenCAP-BSAandCAP-OVAbymixedanhydride(MA)reactionanddiazotizationreaction.Highperformanceliquidchromatography-Masssepectrum(HPLC-MS)wasusedtoidentifychloramphenicolsuccinate(CAP-HS).UVandELISAwereusedtoidentifytheantigen.Comparedwithd
4、iazotizationreaction,themixedanhydride(MA)reactionarebetter.Keywords:ChloramphenicolImmunogenSynthesisMixedanhydride(MA)Diazotization氯霉素(chloramphenicol,CAP)是对革兰氏阳性、阴性细菌均有抑制作用的广谱抗生素,1947年首次从链丝菌的培养液中提取而得到的抗生素。因CAP效高价廉,在医学和畜牧业中广为应用。但CAP有毒害作[1]用,最严重的是引起再生障碍性贫血和其他恶性血液病。1994年,欧盟开始禁止CAP在畜产品
5、中的使用,欧盟规定CAP残留不得检出。目前,欧盟、美国及日本等许多国家对CAP的要求较以往更严格,目前允许的最大残留量为0.1ppb。1999年9月13日中华人民共和国农业部发布了动物性食品中兽药最高残留限量的通知,规定了CAP在所有食品动物的可食用组织中不得检出。虽然各个国家对CAP的残留作了严格规定,但是CAP在畜产品的残留仍时有发生,这就要求建立一种高灵敏的检测方法。测定食品中CAP含量的高效液相色谱分析方法和气相色谱等仪器分析方法、微生物法和比色法的样[2~5]品前处理及测定过程操作繁琐,费用高,不适于大量样品筛查和在基层推广使用。而免疫分析方法具有灵敏度
6、高、特异性强和样品前处理相对简单等优点,适于现场监控和大量样品筛查,也可以直接应用于生[6]产实践。为了建立免疫分析方法,首先必须制备出效价高特异性强的抗体。CAP是小分子物质(分子量323.13),本身不具有诱导产生抗体的能力。为此,必须设法先将小分子CAP与载体蛋白质偶联制备成全抗原,这是免疫分析的关键所在。1材料与方法1.1仪器与试剂CAP购于上海生工,BSA为sigma公司产品,OVA购于上海西宝生物,超纯水由本室采用Barnstead公收稿日期:2007-05-08基金项目:科技型中小企业技术创新基金(06c26213201075)作者简介:王雪(198
7、3-),女,在读硕士,从事氯霉素免疫分析方法研究;E-mail:snowvonwang@hotmail.com通讯作者:金坚(1960-),Tel:13706196319,E-mail:jinjian31@126.com178生物技术通报BiotechnologyBulletin2008年第1期司的超纯水器(D7033)制备,96孔微孔板,Nunc公司产品,紫外吸收测定仪DU-650为BACKMAN公司产品,质谱分析仪WATERSPlatformZMD4000,酶标检测仪Bio-RAD,Model450,氯霉素多克隆抗体由江南大学提供。1.2CAP-BSA和CAP
8、-OVA的
