资源描述：
《用硫氰酸盐洗脱法筛选高亲和力噬菌体抗体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、王 刚等 用硫氰酸盐洗脱法筛选高亲和力噬菌体抗体 第2期·93·①用硫氰酸盐洗脱法筛选高亲和力噬菌体抗体②王 刚 王 琰(解放军海军总医院,北京100037) 中国图书分类号 R392111 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2002)0220093204摘 要 目的:建立一种从抗体库中筛选高亲和力噬菌体抗体的方法。方法:选择已知亲和力高低不同的噬菌体抗体以不同的比例组成模拟抗体库,在常规筛选程序的基础上,用不同浓度的硫氰酸盐进行洗脱,选择性去除低亲和力抗体,保留高亲和力体,对最后获得的噬菌体抗体制备质粒DNA进行内切酶谱分析,判断其中高亲和力抗
2、体的比例。结果:实验证明工作浓度硫氰酸盐的孵育不影响噬菌体颗粒的感染活性;抗体库筛选过程中用硫氰酸盐进行洗脱,发现随着硫氰酸盐浓度的增加,洗脱回收的噬菌体抗体中高亲和力克隆的比例逐渐升高。结论:硫氰酸盐洗脱法用于噬菌体抗体的筛选有助于成功获得期望的高亲和力抗体。关键词 硫氰酸盐洗脱法 噬菌体抗体 抗体亲和力Applicationofthiocyanateelutionintheselectionofphageantibodieswithhighaf2finityWANGGang,WANGYan.NavyGeneralHospital,Beijing100037Ab
3、stractObjective:Toestablishamethodfortheselectionofphageantibodies(Phabs)withhigheraffinity.Methods:Simulantlibrarieswereconstructedusinganti2keratinandanti2HBsAgPhabswithdifferentaffinities.Duringthepanningprocedure,thiocanatesolutionsofdifferentconcentrationswereusedaselutionbuffers
4、tofavortherecoveryofPhabswithhigheraffinities.TherecoveredPhabswereidentifiedbyrestric2tionenzymemapping.Results:AllthetestedPhabswereprovedtoleranttothiocyanatetreatment.Bypanningthesimulantlibraries,theratioofPhabswithhigheraffinityintheobtainedcloneswereincreasedalongingwiththeincr
5、easeofNH4SCNconcentrations.Conclusion:ThiocyanateelutionisapowerfulandeffectivemethodtohelpobtainthePhabswithhighaffinityfromphageantibodylibrary.KeywordsThiocyanateelutionPhageantibodyAntibodyaffinity 噬菌体抗体库技术是抗体制备领域的重要技术发,我们设想可否利用这一原理在噬菌体抗体库的平台,通过大容量抗体库不经免疫制备抗体已是研筛选过程中通过使用不同浓度的硫氰酸盐
6、洗脱,选制治疗性人单抗的三大技术之一。为了提高抗体的择性富集亲和力较高的噬菌体抗体克隆,为亲和力性能,往往需要对抗体库中获得的抗体进行体外亲成熟提供一个较为简便的替代筛选手段。本文报道和力成熟,在此技术中如何能在洗脱筛选过程中选我们的初步尝试结果。择性回收亲和力较高的克隆是极为重要的环节,迄1 材料与方法今主要用生物素化抗原配合接有亲合素的磁珠,以1液相体系,通过动力学原理选择高亲和力克隆,需111 抗体、抗原和主要试剂 筛选对象为本室从噬要具有纯化的可溶性抗原,并需将抗原生物素化。菌体抗体库中筛选获得的几株单克隆噬菌体抗体在传统的免疫学实验中4,5,常用硫氰酸盐
7、洗脱法测定(Phab),先用硫氰酸盐洗脱法测定各自的相对亲抗体的相对亲和力,评价不同抗体间亲和力的差异,和指数(RAI),从中选择亲和力较高的抗角蛋白抗其原理是抗体的亲和力越高,将其从结合的固相化体AK3(RAI2113molPL)和亲和力较低的AK1(RAI2抗原上洗脱下来所需要的硫氰酸盐浓度就越高。110molPL)以及亲和力较高的抗HBsAg抗体AB1我们将这一方法应用于噬菌体抗体技术,成功地测(RAI513molPL)和亲和力较低的AB2(RAI218molP3定了噬菌体抗体的相对亲和力。受这一现象的启L)。重组HBsAg购自北京生物制品研究所,人表皮角蛋
8、白由第四军
