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1、1482第四军医大学学报(JFourthMilMedUniv)2001;22(16)·研究原著·文章编号:1000-2790(2001)16-1482-03噬菌体抗体库几种筛选方法的比较1122王刚,刘玉峰,王琰,化冰(1第四军医大学西京医院皮肤科,陕西西安710033,2海军总医院中心实验科,北京100037)关键词:噬菌体;抗体库chainreshuffledlibrary.Theiradvantagesanddisadvantages中图号:R392.11文献标识码:Awereanalyzed.RESULTSSelectionsagainstk
2、eratinbythethreemethodswereallsuccessful.Incomparison,theanti-摘要:目的对多种不同的噬菌体抗体库筛选方法进行比gen-coatedsolidphaseselectionwaseffectiveandreliableand较研究.方法应用抗原固相化吸附筛选法、生物素化抗原thebiotin-basedliquidphaseselectionwasapplicablewith液相筛选法和解离速率筛选法对半合成噬菌体抗体库或轻链highefficiency.Theoff-rateselectio
3、nwasagoodmethodof替换库进行抗角蛋白噬菌体抗体的筛选,比较各自的筛选效isolatingantibodieswithhighaffinities.CONCLUSION率和优缺点.结果3种方法筛选抗角蛋白抗体均获成功,抗Studiedpanningstrategieshaveadvantagesanddisadvantages原固相化吸附筛选法效果可靠,所获抗体特异性高但抗原消respectively.Suchcomparisonsmayhelpchoosetheoptimal耗量大;生物素化抗原液相筛选法方法敏感且节省抗原,可以met
4、hodaccordingtodifferentpurpose.根据实验目的和抗体库性质灵活调节筛选体系,其不足是筛选获得的克隆中容易出现非特异性结合的克隆;而解离速率0引言筛选是选择性获得高亲和力抗体的有效手段.结论不同的筛选策略各具优势,在实际应用中可根据不同的实验目的选噬菌体抗体库技术是一项新的基因工程抗体制择相应的筛选方法.备手段,在人源性抗体的克隆、抗体性能改造以及抗体基因的研究等方面都发挥着越来越广泛的作用.Comparisononpanningstrategiesofphageantibody能否从抗体库中得到预期的抗体受很多因素的制约,
5、library包括抗体库库容、多样性、保存条件、扩增情况以及对抗体库的筛选过程等,其中筛选手段的正确选择与合112WANGGang,LIUYu-Feng,WANGYan,HUA理应用具有重要的意义.我们在抗体库的构建、人抗2Bing角蛋白抗体的克隆及亲和力成熟的研究中对几种不1DepartmentofDermatology,XijingHospital,同的筛选方法进行了比较,现将应用体会报告如下.FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710033,2China;DepartmentofCentricLaborat
6、ory,Navy1材料和方法GeneralHospital,Beijing100037,China1.1材料人表皮角蛋白系西京医院皮肤科制备5-1g·L.大肠杆菌菌株E.coliTG1,XL1-Blue和辅Keywords:bacteriophages;antibodies助噬菌体VCSM13为实验室常规保存.克隆载体p3MH是在pCOMB3H的基础上改建而成,分别在Abstract:AIMTostudyandtocomparetheefficiencyofFd羧基端加上了9E10单抗所识别的十肽和用于纯variouspanningstrategie
7、sagainstphageantibodylibrary.[1]METHODSThreedifferentmethodsincludingantigen-coat-化的6聚组氨酸.各种内切酶均为Promega产品,edsolidphaseselection,biotin-basedliquidphaseselectionT4DNA连接酶购自GibcoBRL.PCR引物均为赛andtheoff-rateselectionwereappliedtoselectanti-keratin百盛公司合成.phageantibodiesfromasemi-synt
8、heticlibraryandalight1.2方法①抗体库的构建与扩增:半合成噬菌体抗体库为海军总医院中心
