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1、Vol.112004/3粮食与食品工业CerealandFoodIndustry标准与检测PCR技术在食品检测领域的最新应用进展12阚欢,王伟1西南林业学院(昆明650224)2云南农业大学食品科技学院(昆明650201)摘要:综述了近年来PCR技术在食品检测领域中的具体应用实例和研究进展,并对PCR技术在食品检测领域中的应用前景做了展望。关键词:PCR;食品检测;转基因食品;微生物中图分类号:TS207.4文献标识码:B文章编号:1672-5026(2004)03-0058-03Latestappl
2、icationofPCRtechniqueinfooddetectionfields12KanHuan,WangWei1SouthweastForestCollege,(Kunming650224)2FacultyofFoodScienceandTechnology,YunnanAgricultureUniversity,(Kunming650201)Abstract:TheexamplesoftheapplicationofthePCRtechniqueandtheadvanceinitsresea
3、rchinfooddetectioninrecentyearsarereviewed.TheprospectofPCRapplicationinfoodfieldismade.Keywords:PCR;fooddetection;geneticallymodifiedfood;microbePCR(PolymeraseChainReaction)即聚合酶链式物,在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下反应,是美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家进行扩增,这种方法也就是PCR技术。扩增过程由K.B
4、.Mullis1983年发明的一种在体外快速扩增特高温变性、低温退火和适温延伸等3步反应作为一定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外个周期,反复循环,从而达到迅速扩增特异性DNA扩增法,也称为无细胞克隆系统。它可以在试管中的目的。高温变性是在体外将含有需扩增目的基因建立反应,数小时后能将极其微量的目的基因或某的模板双链DNA经高温处理,分解成单链模板,低一特定的DNA片段扩增数十万倍,乃至千百万倍,温退火降低反应系统温度,使人工合成的寡聚核苷并且无须通过烦琐费时的基因克隆程序,便可以获酸引物与目
5、的DNA互补结合,形成部分双链,适温[1]得足够数量的精确的DNA拷贝。延伸是将反应循环系统的温度调至适温,在TaqD2随着人们对食品安全性要求的不断提高,PCRNA聚合酶的作用下,有4种核苷酸存在时,引物链技术以其特异性强、灵敏度高和快速准确等优点在将沿着5′→3′方向延伸,形成与模板互补的新链,新食品检测领域得以广泛的应用。链又可作为下一次反应的模板,如此周而复始使目1PCR的技术原理的基因的数量呈几何级数扩增。通常单一拷贝的基[2]因经25～30个循环可扩增100万～200万倍。根据已知的持扩增
6、的DNA片段序列,人工合PCR技术检测的主要步骤为:①运用化学手段成与该DNA两条链末端互补的两段寡核苷酸引对目标DNA提取;②设计并合成引物,引物设计与合成的好坏直接决定PCR扩增的成效,通常要求引收稿日期:2004205214作者简介:阚欢,女,1965年出生,讲师,研究方向:食品科学物位于待分析基因组中的高度保守区域,长度为15与营养。～30个碱基为宜;③进行PCR扩增;④克隆并筛选58粮食与食品工业CerealandFoodIndustryVol.112004/3鉴定PCR产物,将扩增产物进行
7、电泳、染色,在紫外样品增菌后,采用快速裂解吸附法制备模板,用多重光照射下可见扩增特异区段的DNA带,根据该带PCR同时检测EHEC的3种毒力基因eaeA、hlyAB、[3]的不同即可鉴定不同的DNA;⑤DNA序列分析。slt1/2,相应扩增片段依次为1109、302、228bp。检不同的对象如扩增DNA片断序列全知、半知测了60株大肠杆菌和其它菌种:结果12株大肠杆或未知,其PCR参数、退火温度、时间、引物等都有菌0157:H7、1株大肠杆菌026:H11和1株大肠杆较大的差别,将RFLP、Seque
8、nce、反转录PCR等技菌0111:H8,同时检出上述3种基因,2株EAEC检术相结合,形成了众多的衍生技术,如多重PCR,定出了eaeA基因,1株VTEC检出了slt1/2基因,其量PCR,竞争PCR单链构型多态性PCR,巢式PCR余43株大肠杆菌和非大肠杆菌未检出上述基因。[4]等。这些技术的产生将使PCR技术在食品中的检测食品中EHEC时,从样品增菌培养到整个检测应用潜力更加广泛。过程结束不超过8h,方法的检出限≤116cfu/g(mL)。检测的1
