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1、第21卷5期中国病毒学215413-4162006年9月VIROLOGICASINICASeptember2006*HIV整合酶在大肠杆菌中的表达纯化及其应用1,2,32442刘连兴郝彦玲袁国亮许斌陈佩22**1,2**傅晶晶刘勇邵一鸣1中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉4300712.中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京1000503.中国科学院研究生院北京1000494.浙江澳亚生物工程研究院有限公司浙江杭州310018ExpressionandpurificationofHIVIntegraseinE
2、.coliandApplicationinHIVDiagnosis1,2,32442LIULian-xingHAOYan-lingYUANGuo-liangXUBinCHENPei22**1,2**FUJing-jingLIUYongSHAOYI-ming(1.WuhanInstituteofVirology,ChineseAcademyofSciences,Wuhan430071,China;2.NationalCenterforAIDS/STDControlandPrevention,ChineseCenter
3、forDiseaseControlandPrevention,Beijing100050,China;3.GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100049,China;4.HangzhouAusiaBi-tech.Co.,Ltd,Hangzhou310018,China)AbstractHIV-1integraseP31ofRL42strain,aBsubtypeisolate,wasexpressedinE.coliusingpThioHisBv
4、ector(Invitrogen).Therecombinantproteinrepresentedabout30%oftotalcellularproteins.andwaspurifiedbyinclusionbodywashingandIonExchangeChromatographyIEX.ThepurityofP31proteinreachedmorethan95%.PurifiedP31antigendisplayedfairlygoodsensitivityandspecificitywhenprep
5、aredintoimmunoblotstripsandtestedwithHIVreferencesera.ThisworkestablishedafoundationforthedevelopmentofHIVdetectionkits.KeywordsHIV-1IntegraseP31Purification摘要采用pThioHisB系统表达HIV-1整合酶P31蛋白目的蛋白的表达量达到菌体蛋白的30%左右通过包涵体洗涤和离子交换层析蛋白纯度高于95%用纯化后的P31抗原制备成条带免疫试纸条检测HIV参考品血清
6、时表现了很好的灵敏度和特异性本研究为进一步开发HIV-1血清学诊断试剂盒奠定了基础关键词HIV-1整合酶P31纯化中图分类号R511文献标识码A文章编号1003-5125(2006)05-0413-04艾滋病是由人免疫缺陷病毒(Humanimmuno-验要求高无法实现自动化检测等问题此外该类deficiencyvirusHIV)感染所引起的一种严重的传试剂盒生产工艺复杂生产规模小成本高因此染性疾病快速准确的HIV血清学诊断对于预防控开发基于基因工程抗原的新一代免疫印迹试剂成[1,2]制艾滋病具有非常重要的意义免疫印
7、迹试验因为发展趋势其良好的特异性至今仍然被认为是筛查确证HIV整合酶(Integrase,IN)是HIVpol基因3′端编感染的金标准我国目前HIV抗体确认试验使用的码的蛋白质由160kDa前体多蛋白经病毒蛋白酶[3]试剂主要是第一代免疫印迹试剂盒用全病毒裂解加工形成其功能是将逆转录病毒的cDNA整[4]物作为抗原存在条带位置不固定对操作人员经合到宿主细胞的基因组中在艾滋病感染者的血收稿日期2006-02-16修改日期2006-04-03*基金项目卫生部艾滋病防治应用性研究项目WA2002-02-01作者简介刘连兴
8、1980-山东省籍博士研究生研究方向为微生物学**通讯作者.Correspondingauthor.Tel:010-63166184,67871166-1050,13031069461;E-mail,yshao@bbn.cn,liuyongsd@21cn.com万方数据414中国病毒学第21卷清中针对整合酶P31的抗体有很高的检出率仅压匀浆破碎离心后沉淀用洗
