呋喃果糖苷酶活力高效液相色谱检测法建立

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1、13一呋喃果糖苷酶活力高效液相色谱检测法的建立邵佩霞(华南理工大学轻工与食品学院，广州510640)摘要：B一呋喃果糖苷酶被广泛应用于功能性食品低聚果糖的生产，它同时具有水解活力和转移活力，在不同条件下，两种活力分布并不一致。本文比较了B一呋喃果糖苷酶活力的三种测定方法。采用3，5一二硝基水杨酸(DNS)法，样品处理简单、成本低廉，但准确度低，宜于工业化生产和实验室粗放测定时使用；测总还原糖和葡萄糖联用法，是对DNS法的改进，但操作复杂、误差较大；高效液相色谱检测法，操作成本较高，但具有灵敏度和准确度高的特点。建立了B一呋喃果

2、糖苷酶活力的高效液相色谱检测法，以浓度为25％(w／V)的蔗糖为酶反应底物，通过检测反应体系中葡萄糖和果糖的含量可准确计算B一呋喃果糖苷酶的水解活力和转移活力，实验结果令人满意。关键词：p一呋喃果糖苷酶；水解活力；转移活力；高效液相色谱检测法中图分类号：TS201．2+5文献标识码：A文章编号：1006—2513(2010)02—0217—05Assayofbeta·—-fructofuranosidaseactivitybyhighperformanceliquidchromatographySHAoPei．xia(Coll

3、egeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510640)Abstract：Beta—fructofuranosidasehasbeenwidelyusedinfructooligosaccharidesproduction，italsohashydrolysisandtransferactivity．Indiferentconditions，twotypesofactivitydistributionisnotunifo

4、rm．Threemethodsofactivitydeterminationwerecomparedinthispaper．The3，5一dinitrosalicylicacid(DNS)methodwithsimplesamplepro-cessingandlowcost，butlowaccuracy，issuitableforindustrialproductionandlaboratorydetermination．Thetotalre—ducingsugarandglucosedeterminationmethodwi

5、t}lcomplexoperationandlargererroristheimprovementofDNSmeth—od．Thehighperformanceliquidchromatography(HPLC)methodwithhigheroperationcostshashighsensitivityandaccuracy．TheHPLCmethodwith25％(w／v)sucroseastheenzymereactionsubstrateWasestablished．Thehydrol—ysisandtransfer

6、activityofbeta—fructofuranosidasecouldbeaccuratelycalculatedbytestingthecontentsofglucoseandfructose，andtheexperimenthadsatisfactoryresults．Keywords：beta—fructofuranosidase；hydrolysisactivity；transferactivity；HPLC13一呋喃果糖苷酶(EC3．2．1．26)不仅可以给含有羟基的受体。因此，一呋喃果糖苷酶同从各种p—D一呋

7、喃果糖苷底物的非还原端释放B时具有水解活力和转移活力。B一呋喃果糖苷酶一果糖，还能用蔗糖作果糖基供体将果糖基转移被广泛应用于低聚果糖(主要为蔗果三糖、蔗果收稿日期：2009—05—09作者简介：邵佩霞(1985一)，女，硕士研究生，研究方向为食品生物技术。主ChinaFoodA麓ffiv坌：r=堑：：：二_~整：．四糖、蔗果五糖)的生产中。低聚果糖是重要的改进，但引入葡萄糖氧化酶，存在着产物产率的功能性食品，具有低热值、抗龋齿、促进肠道双问题，即生成的葡萄糖可能不能充分被氧化成葡歧杆菌增生、缓解便秘、降低血液胆固醇和脂肪萄糖酸

8、而产生较大误差，且成本较方法(1)高，含量以及促进动物生长等一系列优良的生理保健操作较繁杂。功能⋯。许多研究小组在世界各地正致力于开发(3)高效液相色谱(HPLC)法新技术用于生产低聚果糖。此法用一定浓度的蔗糖反应，用HPLC检测在蔗糖为底物的酶催化体系中，蔗糖在低浓反应液中