生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚卵裂的影响

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1、繁殖生理·ReproductionandPhysiology2009年第45卷第3期生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚卵裂的影响*刘永，王星，姜午旗，冷义福，罗光彬（沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110161）摘要：本研究探讨了生长激素(STH)和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明：在mNCSU-23液中，添加0.15μg/mLSTH组的成熟率(73.83%)和卵裂率(64.76%)显著高于对照组和添加0.01、0.05、0.1、0.2μg/mLSTH组(P<0.05)；添加5μg/mL和

2、8μg/mL胰岛素组的成熟率(66.25%、60.64%)显著高于添加0、0.5、2μg/mL及10μg/mL组(P<0.05)；添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率(61.63%)显著高于添加0、0.5、2、8、10μg/mL组(P<0.05)；最佳的联合添加组为0.15μg/mLSTH+2μg/mL胰岛素，其体外成熟率为79.37%、卵裂率为72.31%。关键词：生长激素；胰岛素；猪卵母细胞；体外成熟；卵裂；猪中图分类号：S828.3文献标识码：A文章编号：0258-7033（2009）03-0012-03猪卵丘－卵母细胞复合

3、体（COCs）在体外培养验室。用带1.2规格针头的10mL一次性注射器抽过程中受到多种因素的影响。生长激素(STH)是由取卵巢表面直径2~5mm卵泡内的COCs。在体视显垂体前叶生长激素细胞所分泌的一种肽类激素,为微镜下检出具有3层以上致密卵丘细胞层的COCs，机体生长所必需。生长激素在卵泡的募集和卵母细用含5%FCS的DPBS洗3次。胞生长的启动方面起到尤为重要的作用[1]。研究表1.2COCs成熟培养进行培养之前，用成熟培养明，STH还可显著提高人小腔卵泡卵母细胞的生发液洗3次，移入上覆矿物油的50μL培养滴中，每滴泡数量

4、并可显著提高其体外成熟率和受精率[2]。胰放10~15枚COCs，在38.5℃、5%CO、饱和湿度条2岛素（insulin）是小分子蛋白质，在体内主要调节代件下成熟培养。成熟培养液分别为mNCSU23（NC-谢过程。研究表明，在猪的卵母细胞培养液中添加SU23＋0.55mg/mLhypotaurine＋10%PFF＋20IU/mL一定量的insulin和17β-E2有助于提高卵母细胞的PMSG＋20IU/mLhCG），mNCSU23中分别添加0.01、成熟率和卵裂率[3]，而且insulin还能促进体外受精0.05、0.1、0

5、.15、0.2μg/mL的STH，mNCSU23中分别早期胚胎的发育[4]。虽然单独添加以上2种激素都添加0.5、2、5、8、10μg/mL的insulin。培养44h后，有助于提高猪卵母细胞的体外成熟率及卵裂率，但以出现第一极体为成熟标准。在猪卵母细胞体外成熟培养液中联合添加2种激素1.3卵母细胞孤雌激活及培养成熟的卵母细胞能否使成熟率进一步提高，还有待证明。因此，本研移入上覆激活液（0.3mol/Lmannitol+0.05mmol/L究旨在进一步探讨生长激素与胰岛素对体外培养猪CaCl2+0.01mmol/LMgCl2）

6、平行电极中，使用日本ET3卵母细胞体外成熟及卵裂的影响，并确定二者的最悟空细胞融合仪，设置电场强度130V/mm、脉冲时佳添加剂量。程为80s、脉冲次数1次，进行激活处理。激活后卵子移入含7.5mg/L细胞松驰素B(CB)+10mg/L放线1材料与方法菌酮(CHX)+4g/LBSA的NCSU-23中培养4h，然后1.1COCs采集从屠宰场采集的猪卵巢，放入装在含4g/LBSA的NCSU23小滴中培养44~48h观察有35~37℃生理盐水的保温瓶中，在2h内送回实卵裂，培养条件与成熟培养相同。————————————————1.

7、4统计分析所得资料采用SPSS12.0统计软件收稿日期：2008-05-30；修回日期：2008-11-25作者简介：刘永(1982-)，男，硕士研究生进行显著性检验，对成熟率、卵裂率进行单因素方差*通讯作者分析，多重比较用邓肯氏法。122009年第45卷第3期ReproductionandPhysiology·繁殖生理表3STH与不同浓度的insulin联合添加对猪卵母细胞体外2结果与分析成熟和卵裂的影响2.1不同浓度的STH对猪卵母细胞体外成熟和卵A+insulin检查卵数/枚44h成熟率/%激活卵数/枚卵裂率/%/(μg

8、-1·mL)裂的影响由表1可以看出，在mNCSU23中添加不A+0.014561.20±1.67c7848.60±2.25c同浓度的STH时，以添加0.15μg/mL组的成熟率A+0.515871.47±1.53b7962.10±2.93b和卵裂率最高，与其他添加组比较差异显