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《cre_loxP系统介导的基因重组研究进展_屈彦纯》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物技术通报·综述与专论·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2001年第5期cre/loxP系统介导的基因重组研究进展屈彦纯邓昌彦刘建忠刘桂兰(华中农业大学畜牧兽医学院,武汉430070)摘要:由于具有时间、组织和位点特异性,cre重组酶介导的DNA重组已成为基因靶位操作的一个重要工具。概述了cre/loxP系统的作用特点,cre重组酶的结构和重组机制,表达载体构建及重组个体检测等方面的问题,重点介绍了cre/loxP系统在基因重组研究中的应用及近来的发展与成就。关键词:cre/loxP系统基因重组基因靶位操作RecentProgressinResearchonGeneRecomb
2、inationMediatedbycre/loxPSystemQuYanchunDengChangyanLiuJianzhongLiuGuilan(CollegeofAnimalScienceandVeterinary,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070)Abstract:DNARecombinationmediatedbycrerecombinasehasbecomeanimportanttoolforgenetargetingbe-causeitistime-specific,tissue-specificandsite-specifi
3、c.Inthispaper,therecombinentcharacteristicsofthecre/loxPsystem,thestructureofcrerecombinaseanditsrecombinationmechanism,theconstructionofexpressionvectorandthedetectionoftheresultofrecombinationincre/loxPsystemisreviewed.Theultilizationofcre/loxPsystemanditsrecentdevelopmentandachivementsarealsoin
4、troducedasanimportantaspect.Keywords:cre/loxPsystemDNARecombinationgenetargeting噬菌体P1cre重组酶是一种无须辅助因子进行转录病毒载体法和精子载体法。相关转基因动物家位点特异性重组的生物酶。它的发现为基因靶位操系的培育为研究cre酶介导的基因重组准备了丰富作创造了有利条件,通过位点特异性DNA重组,实的试验材料。现靶基因结构部分或全部破坏,使其产物不能正确1cre/loxP重组体系的作用特点表达,从而对基因功能的研究产生重大影响。cre/cre重组酶与酵母FLP酶相似,无需辅助因子,loxP系统由cre重组酶
5、及识别序列loxp位点组成。都属于Int重组酶家族。cre酶的分子量为38ku,可通过在靶序列引入标记基因和两侧的loxp位点,以以作用于各种类型的底物(超螺旋环状、松弛型、线cre酶介导位点特异性重组。cre酶介导的遗传重组[3]型)。cre/loxP系统可以介导位点特异性的插可进行定点、定时、定组织的特异性控制。此外,转入、倒置及切除等(表1)。cre/loxP体系介导的基化的ES细胞经历的筛选时间较短,对ES细胞胚胎因缺失可以切除loxp位点之间的全部序列,外部序重建的能力无显著影响,也为它的广泛应用创造了列全被保留,达到以两个重组位点之间或之外不同[1]有利条件。今已广泛用于人工抗
6、体文库的构建、序列设计获得不同的定点修饰靶基因的目的。表达位点特异性染色体易位、靶基因缺失特异基因片段cre的胚细胞中几乎所有loxp之间序列均被切除,的人化动物模型和嵌合基因组等研究领域。分子生效率十分可观,并可在很大的浮动范围内准确预测物学的迅速发展导致了转基因研究的兴起和转基因缺失长度。cre/loxP系统介导的基因重组是一种动物的出现。传统的转基因方法有显微注射法、反可逆的过程,重组程度与cre重组酶的表达水平有作者简介:屈彦纯,1975年生,华中农业大学农业部猪遗传改良重点实验室在读硕士研究生,主要从事动物杂种优势分子机理方面的研究。2001年第5期屈彦纯等:cre/loxP系统
7、介导的基因重组研究进展9关。随着蛋白质晶体结构分析技术的不断进步和晶2Cre/loxP体系的重组原理体衍射技术的出现,人们对cre结构的认识越来越表1cre/loxP系统介导的重组类型靶位点结构重组类型重组酶系统两个反向loxp位点靶位点之间序列倒置cre/loxP两个同向loxp位点靶位点之间序列切除cre/loxP单侧loxp位点序列插入cre/loxP深入。Feng.Guo等分析表明,cre折叠成两个被短绕一个含有
