饲料淀粉糊化度(熟化度)的测定1

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1、1饲料淀粉糊化度(熟化度)的测定DETERMINATIONOFSTARCHGELATINIZATION(COOKINGDEGREE)INFEED熊易强博士，美国大豆协会前言本文介绍的是目前美国饲料工业界普遍采用的测定淀粉饲料热加工程度的方法。此方法实际上是已发表过的测定淀粉糊化度的经典酶解法的简化。该经典酶解法测定淀粉糊化度是将未加工的“生”淀粉(或含淀粉的饲料样品)在给定实验条件下的葡萄糖释放量定为零，将充分煮熟的全糊化淀粉(或与上述含淀粉饲料同一来源的全糊化样品)的葡萄糖释放量定为100，以不同比例的“生样品”与“全糊化样品”的混合物与对应的葡萄糖释放量建立直线回归；测定同一来源的

2、加工过的样品的葡萄糖释放量，根据回归公式，推算加工样品的糊化度(见另文：测定高粱的加工程度和淀粉可利用率的改进酶法，熊易强,S.J.Bartle,R.L.Preston,1990)。该经典方法在商业应用上有两个问题：一是测定手续繁琐，费工耗时；二是生产中往往难以得到与所测样品同一来源的未经加工的“生”淀粉(或饲料)样品。作者在美国饲料部门工作期间，吸取生产单位的检测经验并加以改进，建立了本文所介绍的简化方法，也是目前工业上采用的简化方法。此法是以加工过的样品的葡萄糖释放量与同一来源的全熟化样品的葡萄糖释放量之比值来直接表达淀粉糊化(熟化)度。更确切地讲，该比值所表达的是在给定实验条件下

3、淀粉酶解的有效率(度)。这一推算和表达方式不仅省去了测定“生”样品葡萄糖释放量(对一般谷物来说，该数值为淀粉含量的20—30%)及建立回归公式的步骤；而且，在不需要得知样品的葡萄糖释放量和样品的淀粉含量的情况下，可以直接用光吸收的比值表达糊化(熟化)度，从而进一步省去了建立葡萄糖标准曲线的步骤。需要指出的是，简化法所表达的淀粉糊化度，由于“零点”位置的改变，与经典方法在概念和数值上都有所差别。但从动物对淀粉1首次发表于1999年3月239的利用率的角度来说，这一简化方法应该说是更有意义、更为直接的表达。　设备天平，灵敏度0.001g。　恒温水浴。　分光光度计。　　试剂缓冲液将３.7ml

4、冰醋酸(glacialaceticacid)和4.1g无水乙酸钠(anhydroussodiumacetate)(或6.8gNaC2H3O2·3H2O)溶于大致100ml蒸馏水中，定容至1立升，必要时可滴加乙酸或乙酸钠调整pH值至4.5±0.05。酶溶液将750mg脱支酶(amyloglucosidase,Sigma,No.A-7255，浓度12100单位/g)溶于50ml蒸馏水。此溶液含粗制酶15mg(或180单位/ml)。测试当天配制。　蛋白沉淀剂1.ZnSO4·7H2O,10%(w/v)蒸馏水溶液。　2.0.5NNaOH。　铜试剂将40g无水Na2CO3溶于大致400ml蒸馏水中

5、，加7.5g酒石酸(tartaricacid),溶解后加4.5gCuSO4·5H2O。混合并稀释至1立升。磷钼酸试剂取70g钼酸(molybdicacid)和10g钨酸钠(sodiumtungstate)，加入400ml10%NaOH和400ml蒸馏水。煮沸20—40min以驱赶NH3。冷却，加蒸馏水至大约700ml,加250ml浓的正磷酸(85%H3PO4)，用蒸馏水稀释至1立升。　葡萄糖标准液溶解100mg纯葡萄糖于70ml蒸馏水中，稀释至100ml。测试当天配制。　240操作程序1.先将风干样品细磨碎使全部通过1mm筛。再根据样品含淀粉程度不同，准确称取两份样品各100mg(纯淀

6、粉)、或各150mg(样品淀粉含量60%以上)、或各200mg(样品淀粉含量30—60%)、或各300mg(样品淀粉含量15—30%)、或各400mg(样品淀粉含量15%以下)，分别置于25ml刻度试管内。其中一份供制备“全糊化样品”，另一份为“测定样品”。　“全糊化样品”的制备：向样品中加入15ml缓冲液，混匀后将试管置于沸水浴中加热1h(其间摇动2～3次)，即为“全糊化样品”。用自来水冷却试管，滴加适量蒸馏水使液面恢复到加热前的位置。与“测定样品”一起进行以下步骤。2.向“测定样品”中加入15ml缓冲液。分别向“全糊化样品”与“测定样品”中加入1ml酶溶液。另取一空试管加入15ml

7、缓冲液和1ml酶溶液，作为“空白”。在40℃水浴中保温1h，起初摇动一次，以后每15min摇动一次。　3.保温达1h时，加2ml10%ZnSOO4·7H2O，混匀，再加1ml0.5N#NaOH。用水稀释至25ml，混匀，过滤(用Whatman40滤纸)。　4.准确吸取0.1ml滤液和2ml铜试剂，置于25ml刻度试管中。5.将该试管置沸水浴中6min，保持沸腾，加2ml磷钼酸试剂，继续加热2min。6.用自来水令试管冷却。加蒸馏水稀释至25ml