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《脑啡肽增强胶质细胞的神经营养作用与NO生成减少有关》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生理学报,1999年6月,51(3),327～332327ActaPhysiologicaSinica脑啡肽增强胶质细胞的神经营养作用3与NO生成减少有关33魏光伟 杜莅娜 朱粹青 唐崇仁 曹小定 吴根诚(上海医科大学神经生物学教研室,医学神经生物学国家重点实验室,上海200032)摘 要 本文在SD大鼠大脑皮层胶质细胞2神经元共培养模式上,以神经元存活、突起生长、生长相关蛋白243(growthassociatedprotein243,GAP243)mRNA的表达为指标,观察了脑啡肽对胶质细胞神经营养作用的影响,并
2、对其机理作了初步探讨。结果表明,经脑啡肽处理的胶质细胞能使神经元的存活计数增加28%(P<0105),单个神经元突起总长度增加11%(P<0105),最长突起长度增加16%(P<0105),GAP243mRNA的表达增加26%(P<0105)。然后又观察了-6-12脑啡肽(10～10mol/L)对培养胶质细胞生成一氧化氮(NO)的影响。结果表明,浓度为-8-1010,10mol/L的脑啡肽能明显抑制其生成(P<0105)。结果提示,脑啡肽可能增强胶质细胞的神经营养作用,其机制之一可能是通过抑制胶质细胞NO的生成。关键词
3、:脑啡肽;胶质细胞2神经元共培养;GAP243;NO学科分类号:Q426 胶质细胞是中枢神经系统的主要细胞成分之一,参与构成中枢神经元生存的微环境,[1～3]对神经元的发育、生长及损伤后再生发挥着重要作用。脑啡肽包括甲啡肽(methionine2enkephalin,ME)是中枢神经系统中广泛存在的一类内阿片肽,对中枢胶质细胞的激活、增[4～6]殖、分泌等均有影响。McMillian综合有关文献报道,认为脑啡肽对胶质细胞的作用可[6]能影响到胶质细胞的神经营养作用,从而影响神经元的生长发育与损伤再生。因此,我们拟在中
4、枢胶质细胞2神经元共培养基础上,以神经元存活、突起生长、GAP243mRNA的表达为指标,研究胶质细胞对神经元的营养作用及ME对胶质细胞神经营养作用的影响,[7]已有报道,胶质细胞是中枢神经系统中一氧化氮(NO)的主要来源之一,NO依其来源、生成量及氧化还原状态的不同而具有神经保护或神经毒作用;亦有报道,体外培养胶[8][9]质细胞生成的NO可引起神经元的死亡,并且ME可抑制NO的跨膜释放。为此,本实验进一步观察了胶质源性NO对神经元存活、突起生长的影响及ME对胶质细胞生成NO的影响,以期探讨ME影响胶质细胞神经营养作
5、用的机理。1 材料和方法[10]111 细胞培养 大鼠大脑皮层胶质细胞培养:按Conn方法行皮层胶质细胞培养。简5述如下:取出生后2d内SD大鼠大脑皮层,用0125%胰蛋白酶制备细胞悬液,以2×101998207204收稿 1998210228修回3国家教委博士点基金(No19506197)、国家自然科学基金重点项目(No139730510)资助33联系作者©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.328生 理 学 报
6、 51卷2细胞/cm的密度接种于12孔培养板,置于37℃、含5%CO2的培养箱内孵育,每3天更换一次培养液,培养液为含5%胎牛血清、10%小牛血清的DMEM。[10][11]大鼠大脑皮层神经元培养:参照Conn及Bank方法,取胚胎16dSD大鼠大脑皮42层,用0125%胰蛋白酶制备细胞悬液,以2×10细胞/cm的密度接种于经PLL处理的12孔培养板,置于37℃、含5%CO2的培养箱内孵育,1d后更换1/2培养液,以后每3天更换一次培养液,培养液为含10%胎牛血清、10%小牛血清的DMEM。大鼠大脑
7、皮层胶质细胞2神经元共培养:按前述方法培养新生大鼠大脑皮层胶质细胞,7d后加入取自胚胎16d大鼠大脑皮层细胞悬液(密度同上),置于37℃、含5%CO2的培养箱内孵育,1d后更换1/2培养液,以后每3天更换一次培养液,培养液为含10%胎牛血清、10%小牛血清的DMEM。免疫组织化学染色:用ABC法。简述如下:用0101mol/LPBS冲洗培养细胞,依次加入正常血清(1∶200),37℃孵育1h;神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificelonase,NSE)单克隆抗体(1∶200,DAKO,USA)、胶质纤维酸
8、性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)单克隆抗体(1∶200,BoehringerMannheim,Germany),37℃孵育2h,4℃孵育过夜;DAB显色。用PBS取代单克隆抗体行同步实验作为对照。免疫组化染色证实取材于出生2d内SD大鼠的大脑皮层细胞培养,经2次更换培养液后神经元(NSE
