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《小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd_3的细胞特征及基因表达谱分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·1340·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2004,20(8):1340-1344[文章编号]1000-4718(2004)08-1340-05小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd13的细胞特征3及基因表达谱分析△乐飞,张国平,金惠铭,史连国,殷莲华(复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海200032)[摘要]目的:对一种小鼠脑组织来源的血管内皮细胞株bEnd.3的主要细胞特征进行研究并做血管内皮细胞生物学功能基因芯片分析。方法:利用倒置显微镜、扫描和透射电子显微镜观察细胞形态特征;免疫细胞化学法显示血管内皮细胞特异性表面标志;EL
2、ISA定量检测PGE2;流式细胞术、MTT法研究增殖和凋亡、血管内皮细胞基因芯片研究正常培养bEnd13基因表达谱。结果:bEnd13具备多种典型的微血管内皮细胞(MVEC)特征:细胞呈多边形或梭型、呈铺路石样生长;存在管腔样结构(TLS)和毛细血管样网络,细胞表面有丰富的微绒毛;vW因子、CD34阳性;CD31、CD36、CD105等也有不同程度的表达;细胞高水平分泌前列腺素E2(PGE2);多种与正常血管功能密切相关的基因也有不同程度的表达。结论:bEnd.3保留了MVEC的基本特性,可用于心脑血管疾病、肿瘤等重大疾病的发病机制的基础与临床研究。[关键词]bEnd13细胞;
3、内皮;vonWillebrand因子;抗原,CD34;寡核苷酸序列分析[中图分类号]R363[文献标识码]ATMbEnd13是美国ATCC(AmericanTypeCultureCol2白酶、EDTA(Ameresco);GEArrayQ系列小鼠血管内TMlection)收录的一种血管内皮细胞株,目前已在国内皮细胞生物学基因芯片(GEArrayQserialmouseen2[1-4]外很多实验室应用。但对于其究竟是大血管内dothelialcellbiologygenearrayBulkkit,SuperArray);兔皮细胞还是微血管内皮细胞(microvascularend
4、othelial抗小鼠CD34、vW因子单克隆抗体,山羊抗兔IgG抗cell,MVEC)国内外还没有明确结论。本研究拟从体等为美国SantaCruz公司产品;DAB显色试剂盒bEnd13的形态特征、细胞表面标志、细胞增殖动力(华美生物工程公司);PGE2ELISA定量检测试剂盒学、凋亡、基因芯片检测等多方面对此细胞株进行系(R&D);二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)(Sigma);统分析。其它试剂均为国产分析纯以上级别。3方法材料和方法311bEnd13培养培养条件:37℃、5%CO2、饱和1主要仪器湿度;用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液将细小鼠脑血管内皮细胞株bEnd
5、13来自复旦大学胞培养至铺满瓶底后用含0125%胰蛋白酶、0103%遗传学研究所。倒置显微镜(Leica),CO2细胞孵育箱EDTA的消化液消化细胞并按110×104/cm2分瓶,2(Heraeus),超净工作台(苏州净化设备有限公司),连-3d换液。续光波酶标仪(Bio-Rad),流式细胞仪(BectonDick2312MTT试验参考Vosseler等[5]的方法。生长曲inson),透射电子显微镜(Philips),扫描电子显微镜线记录的是bEnd13连续培养7d的结果;横轴表示(Hitachi)。细胞培养天数,纵轴以A492间接反映细胞数目。2主要试剂313免疫细胞化学染
6、色参考Edward等[6]的染色DMEM高糖培养基(Gibco),胎牛血清(杭州四季方法,实验中用抗体稀释液作阴性对照。青生物工程材料公司),碱性成纤维细胞生长因子314流式细胞检测凋亡和细胞周期按前面“细胞(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF;PeproTech),胰蛋培养”中所述的方法培养bEnd13至密度约为80%(分瓶传代后继续培养2d),用常规方法将单层贴壁[收稿日期]2004-03-08[修回日期]2004-05-20细胞消化吹打成单细胞悬液后经乙醇固定、染色后3[基金项目]国家“十五”“211”工程重点学科建设基金资助上机检测,凋亡率
7、及处于各细胞周期的细胞比例用项目△通讯作者Tel:021-54237081;E-mail:hmjin@shmu.edu.cn百分比表示。·1341·315扫描及透射电镜按常规操作进行。结果316ELISA测定细胞培养液PGE2含量将消化好的bEnd13单细胞悬液按410×104/well接种至24孔1bEnd13细胞形态特征板,每孔加培养液1mL,细胞继续培养36h后收集培如图1A所示,bEnd13在细胞铺满时呈梭型或长养液,然后按试剂盒说明书测定PGE2。条形并呈铺路石样生长;而在细胞密度
