多巴胺受体和脂筏对高血压患者细胞NADPH氧化酶的作用

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Mar；48(3)·211·多巴胺受体和脂筏对高血压患者细胞NADPH氧化酶的作用鹿敏，刘晓颖，韩卫星摘要目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化控制Nox亚单位在肾脏近曲小管细胞的表达，从而酶(NADPH氧化酶即Nox)亚单位在高血压患者肾脏近曲小导致氧化应激状态。现探讨Nox亚单位在高血压患管细胞中的表达及其活性变化，以及多巴胺受体和脂筏在其者中的表达及其活性变化，以及多巴胺受体及脂筏中的调节作用。方法细胞分为正常组和高血压组，未经任的调节作用。何药物刺激的两组细胞分

2、别作为正常对照组和高血压对照组，采用葡萄糖浓度梯度超速离心法提取细胞膜的脂筏和非1材料与方法脂筏区蛋白，经Westernblot检测Nox亚单位蛋白的表达，光1．1材料泽精化学发光法动态测定细胞膜Nox的活性。结果多巴胺受体激动剂fenoldopam明显减少gp91phox在正常对照组1．1．1细胞株分化良好的高血压和正常血压人群的永生性肾近曲小管细胞，由美国弗吉尼亚大学[(17±3．3)％]和高血压对照组[(20±3．4)％，P<0．05]细胞膜脂筏区域的表达，降低正常对照组p22ph[(15±健康科学中心的Robin．A．Felder教授提供。2．0)％，P

3、<0．05]、p67Ph、rac1在脂筏区的表达，但不能减1．1．2仪器与试剂AutoLumatPlusLB953(EG&G少高血压对照组p22、v67ph、racl蛋白的表达；胆固醇耗Beahhold公司)；单克隆抗人Nox亚单位的抗体竭剂3-cD减少正常对照组gp91phox、p22ph在脂筏区的表(gp91phox、p22、p67ph)、抗rac1抗体、二抗(Santa达，不能减少高血压对照组Nox亚单位的表达；高血压对照Cruz公司)；蛋白酶抑制剂、fenoldopam、胆固醇耗竭组Nox的基础活性是正常对照组的5倍。结论高血压患剂B．CD、胆固醇、光泽

4、精、NADPH、二苯基碘(diphe—者肾脏近曲小管细胞具有较高的Nox亚单位的活性，多巴胺nyleneiodonium，DPI)、Apocynin(Sigma公司)；BCA受体和脂筏对Nox亚单位的抑制作用减弱。试剂盒、ECL试剂盒(Pierce公司)；细胞培养试剂关键词NADPH氧化酶；多巴胺受体；脂筏；高血压(Invitrogen公司)。中图分类号R544．11．2方法文献标志码A文章编号1000—1492(2013)03—0211—051．2．1细胞培养及处理分化良好的高血压和正常血压人群的永生性肾近曲小管细胞分别作为高氧化应激是指在各种有害刺激时机体或

5、细胞内血压组和正常组，在含5％胎牛血清的DMEM／F12自由基的产生和抗氧化防御之问的严重失衡，活性培养液，37℃、5％的CO孵育箱中培养。细胞在无氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的积蓄引起细胞毒血清的DMEM／F12培养液中饥饿1h后给予药物性反应而导致组织损伤过程。还原型烟酰胺腺嘌呤刺激，未经任何药物刺激的正常组和高血压组分别二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH氧化酶，即Nox)是产作为正常对照组(NC)和高血压对照组(HC)，经生ROS的主要来源，ROS包括超氧阴离子、过氧化fenoldopam(1~mol／L／20min)刺激的两组细胞

6、分氢、羟基等⋯。氧化应激在高血压的发展中有着重别作为正常fenoldopam组(NF)、高血压fenoldopam要的作用，其引起的血管损害是高血压发生发展中组(HF)，经B．CD(2％／1h)刺激的两组细胞分别的重要环节J。既往研究显示多巴胺受体和脂作为NI3一CD组、HB—CD组。筏结构及功能的正常可抑制正常人肾脏近曲小管细1．2．2膜蛋白标本的获取用fenoldopam处理正胞的Nox活性及亚单位表达。高血压患者可能存在常组和高血压组细胞，通过普通离心方法获得膜蛋多巴胺受体和脂筏的功能受损，不能很好地调节和白标本，包括细胞膜和细胞质。用fenoldopam

7、以及2012—10—08接收B．cD分别刺激正常组和高血压组细胞，通过葡萄糖基金项目：国家自然科学基金(编号：81070210)浓度梯度超速离心法取得脂筏和非脂筏区部分的膜作者单位：安徽医科大学第一附属医院心血管内科，合肥230022蛋白标本。安徽医科大学生命科学院生物学教研室，合肥2300321．2．3Westernblot将所获得的脂筏和非脂筏蛋作者简介：鹿敏，女，硕士研究生；白样本中分别取30l蛋白，加样到8％一16％的韩卫星，女，主任医师，博士生导师，责任作者，E—mailhwx57@yahoo．corn．cnSDS聚丙烯酰胺分离胶上进行电泳，用直流电2

8、2mA·214·安徽医科