NADPH氧化酶4在A549细胞上皮—间质转化中的作用

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1、学校代码10459学号或申请号201512273124密级公开硕士学位论文NADPH氧化酶4在A549细胞上皮-间质转化中的作用作者姓名：薛腾导师姓名：周舫教授学科门类：医学专业名称：劳动卫生与环境卫生学培养院系：公共卫生学院完成时间：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterRoleofNADPHOxidase4inEpithelial-MesenchymalTransitionofA549CellsByTengXueSupervisor:Prof.FangZhouDepartmento

2、fOccpationalandEnvironmentalHealthSciencesCollegeofPublicHealthMay2018学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保

3、留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日摘要背景与目的肺癌是严重影响人类健康的恶性肿瘤，造成肺癌病人死亡的主要原因之一是肺癌的转移。上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymaltransition,EMT）进程是肺癌转移的重要机制之一，同时是促进肿瘤

4、转移的重要步骤。因此探索细胞的EMT进程机制，将会为肺癌转移的治疗提供理论依据。转化生长因子-β（Transforminggrowthfactor-β,TGF-β）是一类多功能细胞因子，是体外细胞EMT模型的经典诱导因子。NADPH氧化酶4（Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate4,NADPH4）是NOX家族里面的一个重要类型，其主要作用是产生活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）。ROS可以作为第二信使促进细胞内一些信号通路的转导，进而调控细胞的增殖、凋亡、分化以及迁移等生物学行为。在乳腺癌细胞中，丝裂原活化

5、蛋白激酶（Mitogen-activatedproteinkinase,MAPK）信号通路介导了TGF-β诱导的细胞EMT进程。在人恶性胶质细胞瘤细胞中，TGF-β可以激活核转录因子-κB（Nuclearfactor-κB,NF-κB）信号通路，进而促进EMT进程。在前期实验中，TGF-β诱导A549细胞EMT进程时，伴随着NOX4蛋白以及ROS水平的增加，并且促进细胞的迁移。那么，MAPK、NF-κB信号通路是否介导TGF-β诱导的A549细胞EMT进程？MAPK、NF-κB(p65)与NOX4在A549细胞EMT进程中有着怎样的关系？为了探索以上问题，本课题用TGF-β

6、刺激A549细胞以构建EMT模型，然后分别用DPI、SB203580、BAY11-7082抑制NOX4、p38MAPK以及NF-κB(p65)，观察对A549细胞EMT进程以及细胞增殖活性和迁移能力的影响。方法1、实验分组：（1）EMT模型的构建：根据TGF-β质量浓度分为：0.0μg/L组、1.0μg/L组、2.5μg/L组、5.0μg/L组、10.0μg/L组；（2）抑制NOX4表达时分为：空白组，TGF-β组，TGF-β+DPI组，DPI（NOX4抑制剂）组，DMSO（溶剂对照）组；（3）抑制p38MAPK表达时分为：空白组，TGF-β组，TGF-β+SB203580

7、组，SB203580（p38MAPK抑制剂）组，DMSO（溶剂对照）组；（4）抑制NF-κB(p65)表达时分为：空白组，TGF-β组，TGF-β+BAY11-7082I组，BAY11-7082（NF-κB(p65)抑制剂）组，DMSO（溶剂对照）组。2、蛋白的检测：WesternBlot检测NOX4蛋白、EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白，信号通路蛋白p38MAPK、p-p38MAPK、JNK、p-JNK、NF-κB(p65)、p-NF-κB(p-p65)蛋白的表达。3、mRNA