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1、北方园艺2010(14):127~130#生物技术#大肠杆菌高效感受态细胞的制备及快捷转化体系的建立杨坤,巩振辉,李大伟(西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100)摘要:比较了不同方法制备的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,并优化了质粒DNA转化感受态细胞体系。结果表明:高效法制备的感受态细胞转化效率极显著高于普通法制备感受态细胞的转化效率,其效率提高了966.1%,而高效法感受态细胞转化效率与商品化的感受态细胞转化效率差异不显著。-80e超低温长期保存时,相比较于15%甘油,以7%DMSO为冻存保护7剂保存的感受态细胞其转化效率达到1.1@10,较15%甘油冻存保护剂保
2、存的转化效率提高了769%。温浴5min,冰浴10min时,其转化效率最高,达到4.95@10。应用高效法制备的感受态细胞转化不同大小质粒的效率极显著高于普通大肠杆菌感受态细胞,其转化效率较普通大肠杆菌感受态细胞的提高了550%,而转化时间缩短至普通大肠杆菌感受态细胞的12.5%,仅为15min。关键词:高效法;感受态细胞制备;质粒DNA;转化效率中图分类号:Q943.2文献标识码:A文章编号:1001-0009(2010)14-0127-04质粒转化大肠杆菌感受态细胞是分子克隆的关键第一作者简介:杨坤(1984-),男,陕西咸阳人,在读硕士,现主要从步骤,是基因克隆以及D
3、NA文库构建等研究中频繁使事蔬菜育种及生物技术研究工作。用的一项基本操作技术。这项技术分为2个部分:大肠通讯作者:巩振辉(1957-),男,陕西礼泉人,博士,教授,博士生导师,现主要从事蔬菜种质资源与生物技术研究工作。杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA的转化。目前,制[1]基金项目:国家自然科学基金资助项目(30571262;30771467);备感受态细胞最常用的方法是氯化钙法。此方法廉/131150科技创新工程重大科技专项资助项目(2008ZDKG-03);教价、便捷。但是在实际操作中,其转化效率常常不能满育部高校博士点基金资助项目(200807120007)。足试验的要
4、求,转化效率不稳定。而市场中一些生物公收稿日期:2010-04-15参考文献[6]刘晓明,王朝忠.美国风景园林大师彼得#沃克及其极简主义园林[1]王向荣,林箐.西方现代景观设计的理论与实践[M].北京:中国建[J].中国园林,2000(4):35-41.筑工业出版社,2002.[7]费蓄.极少主义绘画与雕塑[J].世界建筑,1998(1):63-67.[2]王晓俊.西方现代园林设计[M].南京:东南大学出版社,2000.[8]罗枫,王晓俊.西方现代园林中的现代主义渊源[J].山西建筑,2005,[3]周向频.欧洲现代景观规划设计的发展历程与当代特征[J].城市规31(2):
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6、.徽科学技术出版社,1999.[11]谢立中./现代性0及其相关概念词义辨析[J].北京大学学报,2001(5):23-25.DiscussionofMainTrendsinWesternModernLandscapeDesignLIUHong-xiu,HUOYan-hong(CollegeofLightIndustry,HebeiofPolytechnicUniversity,Tangshan,Hebei063000)Abstract:Afternearlyonecenturydevelopment,westernmodernlandscapehasformeditsow
7、nstyleandformwhichisdifferentfromtraditionallandscape.Widelyaffectedbytheirmodernlandscapethoughtanddesignstyle,modernland-scapehasgraduallywentoutfromtraditionandformedsomecharacteristicswhichareobviouslydifferentfromthetrad-itionalform.Thispapertalkedaboutth
