一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化方法

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1、第"9卷第$期汕头大学医学院学报A/6Z"9B/Z$/##!;/<0")6/$=.)"(/<>"%?’03%(9-’*%&)65/66’@’/##!一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化方法李明才，何韶衡（汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所，广东汕头!"!#$"）［摘要］目的：建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法。方法：质粒%&’加入感受态细胞，经短暂冰浴和热休克后，直接涂布预热至()*的平板。以大肠杆菌%+!!为受体菌，研究,-,./溶液浓度、感受态细胞的存放时间

2、、转化时间及转化后的培养时间等对质粒转化效率的影响。结果：以"##001.23,-,./溶液制备感受态细胞，冰浴转化!045，经$/*热休克作用6#7后直接涂平板筛选转化子，获得与常规转化方法相当的转化效率。,-,./溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响，而转化时间和转化后的振荡培养时间对转化效率的影响不明显。结论：成功地建立了一种高效、快速的感受态细胞制备及质粒转化的方法。［关键词］大肠杆菌；质粒；转化；感受态细胞［中图分类号］8)9；:()［文献标识码］’［文章编号］"##);$)

3、"<（/##!）#$;#//9;#(!"#$$%&%’"()"*+),%*-’(./*$/0(.’10’,)0)(%/")"*20)"3$/04)(%/"/$5/4,’(’"(5’663$0/4!"#$%&’#$’(#)*’3=>45?;@-4，+ABC-1;CD5?（!""#$%&’()*(+"’,,’-./(0#1#’$23*(1-.-4-#，53’(-/46(.7#$1.-&8#).2’"9/""#%#，53’(-/4!"!#$"，93.(’）［!73(0)&(］EFGD@H4ID：J1D7H-

4、F.47C-5DKK4@4D5H-5LM-N4L0DHC1LK1MHCDNMDN-M-H415-5LHM-57K1M0-H4151K@10NDHD5H@D..7KM10:123#$.23.’2/".O>DHC1L7：JCDI-M41P7H40D45@PF-H4151K@10NDHD5H@D..7Q4HCN.-704L7154@D-5L7NMD-L45?15H1-?-MN.-HD7Q-M0DLFDK1MDC-5LH1()*OJCDL4KKDMD5HDKKD@H71KHCDHM-57K1M0-H4ID@1

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8、57K1M0-H415；@10NDHD5H@D..［<］质粒%&’转化大肠杆菌是分子生物学研究中的基因克隆需要，但耗时长。为此本实验室对此最常规的方法之一。体外重组%&’分子必须导入法进行了改进，即在其内联合其它二价金属离子、适当的受体细胞进行繁殖，才能获得大量的阳性重二甲亚砜或还原剂等［<］，使感受态细胞的制备和质组子克隆和（或）表达目的基因产物。质粒转化的方粒转化更加快捷，为实验者节省了宝贵的时间。［"，/］［(］法主要有化学法和电穿孔法。电转化法转