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《隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、分子植物育种，2008年，第6卷，第6期，第1182-1186页MolecularPlantBreeding,2008,Vol.6,No.6,1182-1186新思路、新技术、新方法NovelThinking&Technology隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建周波孙梅阎淑滑李玉花*东北林业大学花卉生物工程研究所,哈尔滨,150040*通讯作者,lyhshen@126.com摘要隐花色素是植物向光反应的主要的光受体，介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我
2、们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT-PCR方法从“津田”芜菁(BrassicarapaL.subsp.rapa“Tsuda”)总RNA中扩增出CRY2基因的cDNA部分片段，采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR221中。测序表明，该片段与拟南芥具有87%的同源性，与油菜和中国大白菜的同源性达97%以上。采用gateway技术中的LR反应，以植物表达载体pH7G
3、WIWG2(I)为基础，构建了由组成型启动子35S调控的CRY2基因的ihpRNAi植物表达载体。关键词隐花色素CRY2基因,RNAi,植物表达载体cDNACloningandConstructionofRNAiPlantExpressionVectoroftheCryptochromeGeneCRY2ZhouBoSunMeiYanShuhuaLiYuhua*InstituteofFlowerBiotechnology,NortheastForestryUniversity,Harbin,150040*Correspo
4、ndingauthor,lyhshen@126.comAbstractCryptochromeisagroupofflavin-typeblue/ultraviolet-Alightsensingphotoreceptorsthatregulatevariousgrowthanddevelopmentalresponsesinplants.CRY2regulatesde-etiolationandfloweringtimeinAra－bidopsis.AccordingtotheconservativecDNAsequ
5、encesofCRY2inArabidopsis(NM_100320),Chinesecabbage(AY176689)andBrassicanapus(AJ889779),thehomologyprimersweredesigned.Furthermore,thepartialcDNAofCRY2wasamplifiedfromtotalRNAofBrassicarapaL.subsp.rapa“Tsuda”byRT-PCR.Theobtainedsequenceshows87%identitytoCRY2ofAra
6、bidopsisandover97%identitytothatofChinesecabbageandBrassicanapus.Moreover,thespecialfragmentwasconstructedintotheplantexpressionvectorpH7GWIWG2(I)byGatewaycloningtechnology.Theexpressionvectorwasregulatedby35SpromoterandexpectedtotranscriptintronsplicinghairpinC
7、RY2RNAandinterferetotheinherentCRY2gene.KeywordsCryptochromegeneCRY2,RNAi,Plantexpressionvector隐花色素(cryptochrome,CRY)是首先在拟南芥隐花色素是一种类光解酶的蓝光受体(Lin,中发现的一种吸收蓝光和近紫外光(UV-A)的光受2000)。目前，对拟南芥的CRY1和CRY2功能的研究体，它是一种黄素蛋白(BriggsandOlney,2001)。隐花比较深入，它们在功能上既有重叠又有差别。CRY1蛋色素广泛存在
8、于包括植物、动物包括人在内的真核白介导蓝光信号调节的时钟节奏(Somersetal.,1998)，生物的细胞内。隐花色素具有向光性、抑制幼茎伸而CRY2蛋白调节去黄化反应并控制开化时间(Guo长、叶绿体迁移、刺激气孔张开和调节基因表达等功etal.,1998;Linetal.,1998;Yangetal.,2000)。在能，与光敏
