用RAPD技术对特化等级裂腹鱼类亲缘关系探讨

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1、维普资讯http://www.cqvip.com⑦262一8动物学研究20彻．Aug．21(4)：262—268CN53—1040／QIssN0254—5853Z00calRescm'ch用RAPD技术对特化等级裂腹鱼类亲缘关系的探讨陈自明陈毅峰①&，·(中国科学院昆明动物研究所昆明650223)(中国科学院水生生物研究所武汉430072)擒要：为确定特化等级裂腹鱼类的遗传分化关系，对7种22个裂腹鱼个体进行随机扩增多态DNA(RAPD)研究。从所使用的40个随机引物中，选择了37个扩增带谱清晰的引物进

2、行分析。根据构建的分子系统树显示，特化等级裂腹鱼类划分为3个属级分类单元鞍为合适，这与采用形态学特征进行系统分析所得出的结论一致。在22个个体之间遗传距离矩阵中，最大的遗传距离指数达到了90．38％，此外，还有鞍多的遗传距离指数也在60％～90％之间。通过分析，认为用RAPD标记技术来分析属级或属级以上分类单元的亲缘关系，具有一定的适用性。对于一些遗传差异较大的类群(如裂腹鱼类)，应用属级或属级以上分类单元的亲缘关系，很可能会出现个体之间遗传距离接近或达到100~,的情况，从而无法探讨其相互之间的亲缘关

3、系。^k{．_美键词：呈皇；蹙韭釜堡型些鱼耋；蠢丝羞至。、月茇壁逆纠中图分类号：O959．46+8文献标识码：A文章编号：0254—3853(2000)04—0262—07裂腹鱼亚科(Sehizothoracinae)仅分布于亚洲较为合适；在3个属的系统发育关系上，重唇鱼属中部高原地区，是青藏高原鱼类区系的最典型代较为原始，而叶须鱼属和裸重唇鱼属的亲缘关系最表。根据体鳞、咽喉齿和触须等性状的演化情况，近，它们共同形成重唇鱼属的姐妹群；但在3属内将整个裂腹鱼亚科分为原始、特化和高度特化3个各物种之间的系统

4、发育关系方面，尚无较有说服力等级特化等级裂腹鱼类(specialized的结论(曹文宣，1964；曹文宣等，1981，1999；黄顺友sehizothoraeinefishes)具有体鳞局部退化或全部退等，1986；武云飞等，1992；陈毅峰，1998)。分子水平化、咽喉齿2行、触须1对等特征，共有3属9种上的研究将有助于进一步探讨该类群的分类和系统和亚种。特化等级裂腹鱼类分布于我国云南、四进化关系。川、西藏、甘肃、新疆以及哈萨克斯坦、巴基斯坦随机扩增多态DNA(randomamplified和印度的克

5、什米尔等地的水域。polymorphieDNA，RAPD)分析技术常用于研究近特化等级裂腹鱼类与自晚第三纪以来青藏高原缘种间或种内类群的系统发育关系(Williams等，第2阶段的急剧隆升密切相关。弄清这个类群系统1990)。这种方法以随机设计的寡聚核苷酸链(通发育关系，不但对特化等级裂腹鱼类乃至整个裂腹常为10hp)作为引物，通过PCR来扩增基因组中鱼亚科的分类，而且对揭示这个类群的起源、演化的DNA片段，电泳后使用EB染色就可以记录以及它们与青藏高原隆升的关系等重要问题的研究RAPD标记。与RFLP

6、(限制性片段长度多态性)有着重要意义。不同研究者先后对这3个属及相关等DNA分析技术相比，它具有快速、简单、灵敏的裂腹鱼类进行了分类整理；并根据体鳞、口唇结度高等特点。而且，所用的引物不必专门设计，同构、触须、咽喉齿等形态骨骼特征对特化等级裂腹一引物可以应用于不同的生物学研究领域。前人的鱼类进行了系统学探讨。认为特化等级裂腹鱼类划研究表明，在研究群体到种甚至属级水平的遗传分分为重唇鱼属(Diptychus)、叶须鱼属化关系方面，RAPD是一种很有效的分析技术(陈(Prych曲甜杏)和裸重唇鱼属(Gymn

7、odiptychus)永久等，1997，1998a，b；何舜平等，1996；丁波等，收稿日期1999一lO一27；倍改稿收到日期：2000—02—25基金项目国家重大基础研究发展规划项目(G1998040800)；中国科学院重大项目A；中国科学院九五重点(KZ952—31101)；云南省应用基础研究基金；国家自然科学基金资助项目(39970096)①联系^陈担蜂，维普资讯http://www.cqvip.com4期陈自明等：用RAPD技术对特化等级裂腹鱼类亲缘关系的探讨1999；Demeke等，1992

8、；Stilles等，1993；Welsh等，1．4数据分析1991)。I．4．i任意两个个体之间遗传距离(D)的计算本文通过RAPD分析来探讨所选取特化等级裂可以通过下列公式求出：腹鱼类个体之间、种之间和属之间的遗传分化关D=i—F，F=Nxy／(Nx+ⅣY)系D指遗传距离，F为两个个体RAPD标记的共享片段百分数(0—100％)，NxY是个体X和个体Y1材料与方法PCR扩增分子量相同的DNA片段数，Ⅳx、ⅣY分1．1实验用样品别是个体X、