不同基因型红麻及其近缘种亲缘关系的RAPD分析

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1、安徽农业大学硕士学位论文不同基因型红麻及其近缘种亲缘关系的RAPD分析姓名：徐伟申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：周立人;李爱青20050601摘要本文对红麻7个常规栽培种和12个野生种及5个近缘种进行了RAPD分子标记的研究，在探讨红麻种子基因组DNA提纯方法和优化PCR扩增反应体系的基础上，利用RAPD技术对红麻品种基因组DNA多态性进行分析，依据分子标记研究结果探索了栽培种、野生种及近缘种的亲缘关系及遗传多样性，并对红麻的起源和传播途径作了初步探讨。研究结果表明：1．为了提高效率，论文试验探索出一种稳定、高效的从红麻种子中提取基因组DNA的新方法。该方法在普通的SDS法的

2、基础上进行了重大的改进。在用液氮研磨样品后，先加入预热的提取液继续研磨，然后保温，这样既抑制了DNA酶的水解活性，防止了其对DNA的降解，又使细胞中的基因组DNA得到充分释放。加入氯仿：异戊醇(24：1)后强烈振荡几秒钟，保证了蛋白质的充分变性，又使DNA和其他杂质充分分离。通过此方法获得了高浓度和高质量的基因组DNA，较好地用于PCR扩增，进行’RAPD分析。2．为了提高RAPD反应体系的稳定性，以保证实验的准确性和可重复性，对红麻RAPD反应参数进行了设计，通过优化实验建立了合适稳定的RAPD反应体系。在25Ⅱl反应体系中含有：1×buffer，2．Ommol／LMgCl：，20

3、0umol／LdNTPs，0．6llmol／L随机引物，45ng的基因组DNA，1．OUTaq酶。反应扩增程序为：94℃预变性5min，使模板DNA充分变性，然后进入下列温度循环：94。C变性30sec，38℃退火45sec，72℃延伸Imfn30sec，重复40个热循环，结束循环后72℃终延伸7min。应用此条件进行多次重复，结果重现性良好。3．研究中筛选出了重复性好、有丰富多态性的21个引物，共产生140条带，对12个红麻野生种、5个近缘种和7个来源广泛的各地栽培种进行RAPD分析，其中多态性带119条，占85％，反映出不同红麻品种间存在很大的遗传差异，所筛选的21个引物在供试品

4、种中都有很高的多态性。采用UPGMA(UnweightPairGroupMethodwithArithmeticMean)聚类方法对GD进行遗传分类，将供试品种聚成3大类：近缘种、野生种和栽培种。4．通过RAPD分子标记的研究，探索了红麻品种间的亲缘关系。研究结果表明，不同的红麻野生种同栽培种之间的亲缘关系有很大差别，其中有两个野生种H004、H018也被划分在栽培种这一类，表明了这两个野生种同栽培种亲缘关系相对其他野生种更紧密，推测H004、H018两个品种属于红麻半野生品种。还发现红麻栽培种的遗传多样性并不像形态学所体现的那样丰富：而野生种中分子生物学上的遗传多样性远比形态学和生

5、物学特性所表现的要丰富得多，因此在分子水平上对红麻的研究更显重要。5．在研究供试品种亲缘关系的基础上，进一步探讨了红麻品种的起源和传播途径。野生种被聚类在近缘种和栽培种之间，并且有两个野生种与栽培种聚成了一类。野生分布的红麻材料和它的非洲起源的近缘种之间的遗传距离相对栽培种与近缘种的遗传距离要近的多，而栽培类型的红麻也通过野生红麻种与近缘种保持一定的关系，这在一定程度上支持了红麻起源于非洲的假设，也表明RAPD分析结果可用于对红麻物种进化起源等方面的研究。关键词：红麻RAPD遗传差异亲缘关系起源进化AbstractInthisexperimentation，randomamplifi

6、edpolymorphicDNAOLAPD)techniquewasusedtoanalyzethegeneticrelationshipofsevencultivars，twelvewildspeciesandsixrelativeofHibiscuscannabinus三．．TheextractionmethodologyofgenomicDNAofHibiscuscannabinusL．wasexploredandtheinfluentialparameterswereoptimized．Onthebasisofthem，RAPDwasusedtoinvestigatetheg

7、eneticpolymorphismsamongthetwenty·fourbreeds．Andboththegeneticrelationshipsandthegeneticdifferencesofthemweretoberesearched，furthermore，theKenaf'scradlelandanditstransmitroutewerealSOdiscussed．Resultswereasfollows：1．Tosavetimeandr