一株高产淀粉酶枯草芽孢杆菌的筛选、鉴定及产酶条件的优化

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1、万方数据第4l卷第l期温州医学院学报V01．41No-120l1年1月JournalofWenzhouMedicalCollegeJan．201l一株高产淀粉酶枯草芽孢杆菌的筛选，鉴定及产酶条件的优化陈相达-，戴慧慧1，刘燕1，李圆圆1，翁丛丛1，茹波1，曾爱兵2(温州医学院，浙江温州325035，1．仁济学院；2．生命科学学院)I论著l[摘要]目的：筛选出a．淀粉酶高产茵株，对其发酵特性及分类鉴定进行研究，为丰富产淀粉酶茵种资源和进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。方法：通过初筛、复筛获得高酶活茵株XW86，利用传统的形态观察、系统生理生化

2、反应并结合168rDNA的序列分析，经Blast序列比对构建其系统进化树，确定其分类定位。通过单因素选择实验以及进一步的正交实验和多因素交互实验，进行产酶条件优化。结果：XW86与已报道的枯草芽孢杆茵(B哼cdllussubtlJlsstrainQD517)亲缘关系最近，二者的16SrDNA序列相似性为99％，生理生化反应谱与16SrDNA序列分析一致鉴定为枯草茅孢杆茵。XW86最适产酶条件为：在LB基础培养基中添加0．75％吐温、0．5％淀粉，初始pH6．5，35℃培养120h。液体发酵得到的粗酶液酶活可高达2200U／dL，比优化前提高2

3、．8倍。结论：初步鉴定XW86为枯草茅孢杆菌，产酶因素的最佳组合对其淀粉酶活性有很大的优化空间。该野生型茵株可为淀粉酶发酵工业新备选菌株的开发应用提供资源，也为进一步克隆获得产淀粉酶基因的研究奠定基础。[关键词]a一淀粉酶；枯草茅孢杆菌；条件优化；鉴定[中图分类号]Q939[文献标识码]A[文章编号】1000-2138(2011)01-0040-05ScreeningandidentificationofawildBacillussubttllswithhighamylaseactivityandoptimizationofitsenzyme

4、．1producingconditionsCHENXiangda’。DA，Huihui，LIUYan，LIYuanyuan，WENGCongcong，RYBo，ZENGAiblng．*RendiCollege，WenzhouMeScalCollege，Wenzhot／．。725035ObjectivesToscreenabacterialstrainof0【-amylase-producing，tostudyitshig扣yieldingfermentationcharacteristicsanditsidentificationandlay

5、thefoundationforenrichingtheresourcesofa-amylaseproducingandlappingfurthertheappliedvalueofthisswain．1ileChods：Normalcultureandisolationwereperformedtoisolatethestrains．Theamylaseactivitywasanalyzedviascreeningandre-screenin唱．Thestrainswereidentifiedaccordingtothetraditiona

6、lmorphological，physiologicalandbiochemicalcbaracter-isticsaswellas16SrDNAsequencesimilarityanalysisagainstthegenesofretraivedformGenbank．Thesingle-factorandorthogonalexperimentswereperformedtodeterminetheoptimalconditionsforenzymaticproduction．1kmltmOnthebasisofthephysiolog

7、icalandbiochemicalcharacteristicsaswellas16StDNAsequeflceanalysis．theisolate髓sidentified嬲aspeciesofBacillussubtilisandnamed)c燃．Ithadtheclosetrelationshipwiththepreviouslyrep0—捌Bacillussubtilis(国c“』砸subtilisstrainQDSl7)，andtheir16SrDNAseqtlencesimilarityreachedupto鲫X．Theoptl

8、malanzylae-preducingconditionsforXW86wereasfollows：LBsediomwith0．鼹starchand0．759Tw