产淀粉酶枯草芽孢杆菌.doc

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1、“生物制药技术实训”课程研究报告班级：生物制药081姓名：张静学号：20087091105同组组员：方艳，胡书然，郑磊赞项目一：产淀粉酶枯草芽孢杆菌一实验原理枯草芽孢杆菌的多数中都能产生大量的淀粉酶，较易得到分离。由于芽孢具有较强的抗热能力，分离纯化时可采用热处理的方法，高温加热处理，杀死样品中所有不含芽孢的菌类，在培养过程中使芽孢杆菌得到很好的富集。利用该菌产淀粉酶的特性，选择以淀粉为碳源的分离培养基，菌体分泌的淀粉酶会使菌落周围的淀粉水解，滴加碘液即可在菌落周围出现清晰的透明圈。根据透明圈的直径（C）与菌落直径（H）之比（C/H）可初步鉴定酶活力的高低，即比值越

2、大酶活力越高，进而筛选出优良的生产用菌。二材料灭过菌的种子培养基无菌生理盐水（杀了菌的生理盐水，盐浓度0.9％）培养基配方：蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl10g，水1L，淀粉，1.8%的琼脂PH7.2-7.4，121℃灭菌20min（各量取其三分之一）。三操作步骤1.包平板2.配生理盐水3.根据培养基配方配置培养基，并取出45ml用于液体培养基，其余作为固体培养基4.取1，2，3中配成的平板，生理盐水，大型三角瓶在121℃中灭菌20min75．称取土壤10g与90mL无菌水中，振荡20分，使土壤中菌体或孢子均匀分散，取其悬浮液于80℃下保持10min,以杀死非

3、芽孢的菌体。取5ml悬浮液接入到装有45ml种子培养基的三角瓶内，（于37℃、200r/min摇床中）培养20h6.灭完菌后倒平板，自然冷却凝固后放入恒温培养箱中静致一夜，观察其是否染菌7.将用于做梯度试验的试管8个，每个加9ml蒸馏水，移液管8个，塞棉花拿去灭菌121℃，20min8.取培养后的菌液，用无菌生理盐水适当稀释，取一定量涂布于平板，做梯度试验分别标记为100，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9，10-10。9.将标记的的试管，移取1ml与培养基中涂布并进行标记，于37℃，培养20h10.将灭菌好的平

4、板拿出，进行无菌划线，在培养基中观察到10-8，10-9，10-10，有单一菌落，而10-6，10-7并不明显，．对10-8，10-9，10-10的培养基中的菌落加碘液进行观察，发现有透明圈。711.在无菌操作下，用接种环挑取有透明圈较为明显的菌落，于载玻片上，加入生理盐水，在高倍镜下进行观察，在观察前对菌种用番红进行染色，是观察较为容易。发现这次镜检的产淀粉酶枯草芽孢杆菌较为清晰显杆状，这次我们认定这应该是我们所需菌种。12.对所认定的这几个培养基中的菌种进行菌种纯化，再配培养基，将菌种接种到培养基上，培养20h。四实验结果培养后发现无杂菌，挑取菌落镜检，发现为杆

5、状细菌777参考文献：[1]张建云.α-淀粉酶原因的体外定向进化研究[D]河南农业大学,2004[2]李金霞.耐高温α-淀粉酶基因的克隆、表达及突变[D]天津科技大学,2004.[3]张强.耐高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及发酵条件与酶学性质研究[D]四川大学,2005.[4]朱何东.高温α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究[D]四川大学,2006.[5]杜承.产耐高温α-淀粉酶基因工程菌的构建及酶学性质研究[D]吉林大学,2007.[6]赵子如.古菌SulfolobussofaltaricusP2嗜热嗜酸淀粉酶基因的克隆和表达[D]南京农业大学,2006.7生物制

6、药0801张静7