柯萨奇病毒B3感染对培养大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

《柯萨奇病毒B3感染对培养大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中科技大学硕士学位论文柯萨奇病毒B<,3>感染对培养大鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响姓名：田苗申请学位级别：硕士专业：心血管内科学指导教师：廖玉华2003.4.1!!!!!：!垫叁兰!型塑堕兰堕塑!堂!兰堡；!j!；VMCCVBLTCCJCa-LCmI．v曲线一、英语缩略语viralmyocarditis病毒性心肌炎coxsackievirusBgroup柯萨奇病毒B组L—typecalciumchannelL一型钙通道L-typecalciumcurrentL一型钙电流membranecapacitance细胞膜电容current-voltagerelationshipcurve

2、电流一电压关系曲线RT-PCRreversetranscription—polymerasechainreactionCPEcytopathiceffect逆转录一聚合酶链式反应DMEMdulbecco’SmodifiedeaglemediumMEMFBSBSAEagle’Sminimumessentialmediumfetalbovineserumbovineserumalbumin细胞病变DMEM培养基Eagle培养基胎牛血清牛血清白蛋白!!±型!!!：兰型鲨墨兰堕一一—————————竺_三型!!!!兰二、摘要中文摘要柯萨奇病毒B。感染对培养大鼠心室肌细胞L．型钙电流的影响研究

3、生阳苗导师廖玉华教授华中科技大学同济医学院附属协和医院一tl,内科【目的】建立柯萨奇病毒B3感染大鼠，Ii,室肌细胞模型，观察柯萨奇病毒B3对新生大鼠心室肌细胞形态及结构的影响，了解病毒对心室肌细胞的直接损伤作用。记录感染柯萨奇病毒B3后心室肌细胞L型钙电流的变化，探讨病毒性心肌炎室性心律失常发生的细胞电生理机制。观察柯萨奇病毒B，感染培养大鼠心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA的表达，探讨病毒性心肌炎室性心律失常发生的分子机制。，f【方法】取1～3日龄的新生sD大鼠作一tl,室肌细胞原代培养，用柯萨＼奇病毒B3的Nancy株感染培养48小时已呈规律搏动的心室肌细胞，观察病毒感染前后

4、细胞形态、搏动百分比和超微结构的改变，逆转录聚合酶链式反应检测上清液中是否存在病毒RNA；感染病毒24小时细胞尚未出现明显的病变时，取正常组和病毒感染组心室肌细胞，采用全细胞膜片钳技术分别记录两组细胞的L．型钙通道电流，观察病毒感染fj{『后的L型钙电流变化，加入异搏定进行干预；同批培养的心室华中年1找人学H济医学院肌细胞接利，柯萨奇病毒B3后，采用逆转录聚合酶链式反应技术，以8一actin为内参照，测量病毒感染前后L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化。【结果】正常培养的新生SD大鼠-tb室肌细胞呈规律性搏动，在感染柯萨奇病毒B348d'n'J后细胞搏动逐渐变慢，并逐渐出现细胞病变

5、，最终细胞搏动停止，自盖玻片上脱落、死亡。电镜下观察可见细胞内溶酶体增多，线粒体空泡变性，核膜破裂等超微结构改变。多次换液后逆转录聚合酶链式反应检测到上清液中仍存在病毒的RNA。全细胞膜片钳记录显示，『F常组与病毒感染组心室肌细胞膜电容之间的差异无显著性意义(43．30±5．08pFVS44．50±5．0lpF，P>0．05)，但感染组细胞L型钙电流的平均电流密度要明显大于『F常组细胞(-8．66±0．31pA／pFVS．6．97±0．55pA／pF，P<0．01)，Jlfiif者的电流一电压关系曲线下移，峰电流密度增加25．74％(P<0．05)，异搏定可以消除病毒感染引起的电流改

6、变。逆转录聚合酶链式反应结果显示，病毒感染组心室肌细胞L一型钙通道∞和p亚单位mRNA的表达量较『F常对照组增多(4．00±0．07VS2．21±0．4l，P<0．01；2．06±0．06VS】．22±0．30，P<0．05)，而∞／6亚单位mRNA表达量的改变无统计学^／意义(4．124-0．19vs4．13±0．27，P>0．05)。∥，【结论】本实验所建立的柯萨奇病毒B3感染心室肌细胞模型能够反映病毒刑心肌细胞的直接损伤作用，可作为体外研究病毒性心肌炎的实验模型。柯萨奇病毒B，感染心室肌细胞后使细胞膜L型钙电流增大，可能是病毒性心肌炎室性心律失常发生的细胞电生理机制之一。病毒感

7、染后心室肌细胞L型钙通道∞和序亚单位mRNA的表达量增加，可能是病毒感染导致L型钙电流增大的分子机制之一。!!型!!叁兰l!堕堕兰堕————————————坐上兰j!篁兰【关键词】病毒性心肌炎∥7柯萨奇病毒B组、一L．型钙通道。全细胞膜片钳技术。!!!!I!!叁兰l!塑堕兰堕——————————————型生兰：!!!竺墨ABSTRACTTheeffectofcoxsaekievirusB3ontheL—typecalciumcurrentsincultur