扇贝补体相关分子的结构及功能研究

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1、By-LeileiWangADissertationSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceInstituteofOceanology,ChineseAcademyofSciencesMay,2013Ⅲ0舢2咖4¨刖¨¨●■__■Ⅲ8删3⋯2洲Y原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科

2、研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：互哥舌日期：2b】)．土、z。学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签字：导师签字：王雷由毒牡学4≠艺日期：2．013．譬．二口日期：加降上．、砂致谢致谢本论文

3、是在导师宋林生研究员的悉心指导下和亲切关怀下完成的。从论文的选题、实验思路的确定，实验方案的设计到研究工作的开展和论文的撰写都凝聚着导师辛勤的汗水。宋老师高尚的品德、渊博的学识、敏捷的思维、精辟的见解、严谨的治学态度、刻苦的钻研精神以及忘我的工作热情都是我永远学习的楷模。在此谨向宋老师表示最诚挚的感谢和最崇高的敬意。感谢王玲玲老师在实验设计、论文撰写以及日常工作中给予的悉心指导和大力支持。感谢邱丽梅、张垣、周智、刘瑞和王孟强老师在实验过程中给予的帮助。感谢我们课题组这个充满活力而团结奋进的团队为我的研究工作提供了良好的环境。感谢张莹、杨嘉龙、李凤梅、王兴强、孙志宾、孔鹏飞、刘琳、盖雪梅、史晓委

4、、杨传燕、Vinu、高扬、张莉、岳峰、王晶晶、黄萌萌、吴田田、衣启麟、孙瑞、蒋秋芬、马照鹏、郭颖、张道翔、张涛、孙鑫和孙颖等为我提供的关怀与帮助，你们的帮助是我论文顺利完成的保证，与你们共同奋斗、进步、收获的日子是我人生中永远精彩的篇章。感激开放室高强、邓涪、邓田、吴宁老师及研究生部武伟、屠国华、靳朝晖、张利永、宋彩风和王家栋老师在工作中给予的支持和帮助。感谢兄弟实验室的赵峰、杨光、刘鸿、王超、郑文江、寇奇、邵展茹、游雅楠、温荣、安春艳、赵进和黄爱优等不断给予的帮助、支持和鼓励。同时，感谢海洋所2008级硕士班和2011级春季博士班的兄弟姐妹们在学习、生活和工作中的热心帮助，五年的研究生生活因

5、你们的陪伴而徇丽多彩。特别感谢我的父母、岳父岳母、弟弟、妹妹以及家人和亲人们多年来给予我始终如一的帮助和支持，你们对我的无私付出和灼热期盼永远是我克服困难、勇攀高峰的动力源泉。衷心祝愿你们永远健康、平安和快乐!感谢我亲爱的妻子汤欣欣多年来对我的关爱、理解、支持和照顾，以及宝贝儿子王皓轩给予我不断向前的动力和热情，我们一起走过和将要走过的每一天都是我人生中最珍贵的财富!感谢国家973、863项目及自然科学基金对本研究的资助。本论文承蒙中国海洋大学包振民、张士璀和战文斌教授的评阅，谨此谢忱!王雷雷2013年5月于青岛摘要扇贝补体相关分子的结构及功能研究摘要补体系统是多细胞有机体内重要的免疫效应系统

6、，在固有免疫防御中发挥重要作用。补体相关分子存在于多个无脊椎动物门类中，并参与了宿主的免疫防御。目前，软体动物补体相关分子以及补体激活途径的研究刚刚起步，亟待深入。本论文采用分子生物学、生物信息学和免疫学等多种技术，对栉孑L扇贝(Chlamysfarreri)和海湾扇贝(Argopectenirradians)中的含Clq结构域蛋白(AiClqDC一2，CfClqDC．1和CfClqDC．2)、含硫酯蛋白(CfI'EP)、C型凝集素(AiCTL．9)以及纤维蛋白原相关蛋白(CfFREP)等补体相关分子进行了结构和功能的研究，探讨了它们在扇贝免疫系统中的作用。利用RACE技术从海湾扇贝中克隆获得

7、了AiClqDC．2基因的cDNA序列全长，该分子开放阅读框编码的蛋白序列中含有一个gClq结构域，具有ClqDC蛋白家族典型的由十个B折叠片形成的球形结构以及特征氨基酸残基。RT-PCR检测结果显示AiClqDC-2的mRNA主要在肝胰腺和性腺中表达，并且在扇贝受到不同微生物刺激后，血细胞中的表达量均显著上升。重组的AiClqDC．2可结合LPS、PGN、Yeast．glucan和polyI：C