脂肪基质细胞源性神经元突触释放功能的相关分子结构研究

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1、中图分类号：R741论文编号：2018327001UDC：密级：公开硕士学位论文脂肪基质细胞源性神经元突触释放功能的相关分子结构研究作者姓名：孟燕学科名称：神经病学研究方向：神经生物学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期：2017年4月09日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：元小冬教授单位：华北理工大学附属开滦总医院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：华北理工大学附论文答辩日期：2018年5月16日答辩委员会主席：徐应军教授关键词：脂肪基质细胞；神经元；SynapsinI；Synaptotagmin1；S

2、NARE复合物唐山华北理工大学2018年6月SynapticReleaseofAdiposeStromalCell-derivedNeurons:AMolecularStructureStudyDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyMengYan(Neurology)Su

3、pervisor:ProfessorYuanXiaodongJune,2018独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获

4、学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□√自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要目的探究经β-琉基乙醇（β-Mercatoethanol,βME）诱导的脂肪基质细胞（Adipose-derivedstromalcells,ADSC）源性神经元是否具备正常成熟神经元突触释放功能相关的分

5、子基础及结构基础。方法1体外提取ADSC并进行培养、传代。2利用βME诱导ADSC向神经元进行分化。3ADSC源性神经元的鉴定：免疫细胞化学法和Western-blotting法检测ADSC组、诱导1h、3h、5h、8h组细胞神经元特异性烯醇化酶（Neuronsspecificenolase,NSE）和神经元特异性的微管相关蛋白2（Microtubuleassociatedprotein2,MAP2）的表达情况。4应用免疫细胞化学法、免疫荧光双标法和Westernblotting法检测各组细胞中神经元突触释放功

6、能的核心分子突触蛋白I（SynapsinI）、突触囊泡蛋白2(Vesicle-associatedmembraneprotein2,VAMP2)、突触融合蛋白（Syntaxin1A）、突触小体相关蛋白（SNAP-25）和突触结合蛋白1（Synaptotagmin1）的表达情况及规律。5应用透射电子显微镜（Transmissionelectronmicroscope,TEM）观察诱导5h时ADSC源性神经元的超微结构特征。6统计学分析所取得的实验数据均采用x±s表示，采用Excel2007录入并用SPSS17.0

7、软件包进行统计分析，用单因素方差分析进行F检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果1初提取的ADSC在24h内贴壁，细胞形态多样，以圆形为主。随着培养时间的延长，ADSC逐渐成为长梭形，呈旋涡状生长排列。第三代ADSC纯化完全，生长旺盛适于诱导分化。2正式诱导分化1h时，可见细胞胞质回缩、突起变长。3h时，ADSC源性神经元突起继续增长，且有细胞伸出多条突起出现多极神经元样细胞形态。5h时，ADSC源性神经元轴突样突起的末端出现树突样细小分支，且突起之间相互连接形成网状结构。ADSC源性神经元以双极神经元样

8、为主，且多极神经元数量进一步增多，呈现出典型的成熟神经元样形态。8h时，细胞树突样结构和长突起的数量均少于5h组，ADSC源性神经元形态学上出现退化。3ADSC源性神经元的鉴定：ADSC组不表达NSE和MAP2，在各诱导组均可见NSE阳性细胞和MAP2阳性细胞。在本实验所观察时间点中，NSE和MAP2表达率均于诱导5h时达到高峰，诱导8h组与5h组无统计学差异（P均>0.05）。4免疫