髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞影响的实验研究

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1、华中科技大学博士学位论文髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞影响的实验研究姓名：王华松申请学位级别：博士专业：外科学（骨外科）指导教师：罗永湘2003.4.1苎主黛塾查!翌塑曼竺堕一————苎童!!垫髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞影响的实验研究华孛辩技大学圈济医学院酣糕同济医院骨外辩博士骈究生王孥桧搏鄹罗永湘教授中文摘要【目的】探讨髓内脂肪绷胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响。了解脂肪细飚是否会诱导骨髓基藤细胞凋亡，以溜阐明骨质疏松痰的菜些发病桃制，为其研究掇供～条新的思路。【方法】共分四部分：(1)地塞米松诱导骨髓基凑缩脆成脂分化

2、，洚藉。．·’●．’．二续实艇箍揆缨耱寒源。(2)建立脂貉缀臆与脊髓基质缨燕辩共培养薄系，检溺体系中ALP裰对活性，CollagenImRNA淡达及3H-．proline掺大实验捡溪努髓基囊缎旋胶骥合成鼹杰。(3)驭缨臌爨片，缀楚囊詹，怒薄螺片，透辫电镶观寨缨黢内线粒体、肉震网、棱仁及缨黢膜的交{{：{l擎况。(毒)致共培养体系孛缨藏，攥TLrNEL法、ArmexinV、PI双絷流式细胞仪检测骨髓基攒细胞凋亡。ff【结祭】

3、组中脂肪细胞转化攀最高，达剿90％以上，虽爨备浓凌依赣性。(2)实验组中ALP稿对活彀有所下降，CollagenImRNA表达减弱，3H--proline掺入实验表明骨髓撼质细胞胶原合成熊华中辩救大学同漭嚣学窿捧意学位论文力下降。(3)共培养体系中，骨髓基质细胞胞膜表面绒毛及伪足减少，线越体数基轻度增加且伴有轻度霆孛胀，缨胞核浓聚，核型不规整，有的染色威发生边集。(4)各实验组中，均可见到凋亡细胞，随着脂肪浓度上舞，强亡缨臆数曩增多。烫亡缨赡TUNEL染色呈棕黄色，流式缨胞、仪细胞散点图位于右下象限，即Annexi

4、nV+、PI‘。y【结论】髓内脂肪缨魏霹降低骨髓基质缨藏态ALP活性，减弱CollagenImRNA表达，干扰其成骨能力，并能诱导骨髓基质细胞发生凋亡，在骨质硫松症懿发病孛有蔷重要酌意义。【关键词】骨髓基质细胞脂肪细胞成骨能力凋亡，、；，∥、，·。宴兰!翌燕查竺苎竺墨竺堕!篓竺苎竺苎AnExperimentalStudyofTheEffectsofAdipocytesonBoneMarrowStromalCellsInCavityAbstract【Objective]Toexploretheeffectsofadi

5、pocyteinbonemarrowcavityonosteogenicpotential．stduyifadipocytecouldinduceapoptosisofbonemarrowstromalcell，thentoexplainsomepathogenicmechanismsandfindanewthoughtinosteoporosis．[Methods]Itincludesfourparts：ODexamethasoneinducebonemarrowstromalcelldifferentiatio

6、nintoadipocytes，andprovidesomeadipocytesforthelaterexperiments．③TheCO—culturesystemofadipocyteandbonemarrowstromalcellwereestablished．After4，8，12days，thesamplesweredetectedtheactivityofalkalinephophatase，themRNAexpressionoftypeIcollagenbyhybrizationinsitu，thec

7、ollageasynthesisabilitywith3H—prolineincorporationtest。③Bonemarrowstromalcellswereinoculatedincultureplatewiththeconcentrationof105／mlanddividedintofivegroups，whichaddedsomeadipocyteswithconcentrationsof0，103，104，105，106／mi．Every4days，specimenswerefixedglutara

8、ldehyde，post—fixedwithOs04，dehydratedalcohol，embededinsituwithEpon618。Sectionswerestainingwithuranylacetateandleadcitrateandexaminedintransmissionelectro—microscope．汀嚣M)④Bonemarrow