抗人T淋巴细胞CD4人鼠嵌合抗体真核表达的研究

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1、“06S毒j武汉生物制品研究所硕士研究生毕业论文抗人T淋巴细胞CD4人一鼠嵌合抗体真核表达的研究导师#业研究方向起止时间张雪方志正研究员免疫学基田工程抗体2006年9月一2008年6月二oo八年五月武汉生物制品研究所硕士研究生毕业论文抗人T淋巴细胞CD4人．鼠嵌合抗体真核表达的研究中文摘要CD4属于Ig超家族，为细胞膜表面单链糖蛋白，是HIV的主要受体。CD4+T细胞参与大多数自身免疫性疾病的发生，而抗CD4的抗体可清除或抑制CD4+T细胞，从而调节异常的T细胞应答。国外已对鼠源性抗CD4单抗用于治疗类

2、风湿性关节炎、全身性红斑狼疮等自身免疫性疾病进行了广泛而深入的研究【1，2，3，41，临床疗效良好。但是，鼠源性单抗应用于人体治疗将引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，反复使用可导致人体产生过敏反应且降低治疗效果，将鼠单抗改造为人．鼠嵌合抗体能降低HAMA反应。嵌合抗体临床试用的大量研究表明，它临床疗效好，免疫原性与其它人源化抗体相似，而亲和力常常高于其它人源化抗体。本研究首先对质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH进行双酶切及DNA测序鉴定，证实其为含有鼠源性可变区和人源恒定区的嵌合抗

3、体轻、重链表达载体。然后，绘制SP2／0细胞生长曲线确定SP2／0细胞最适生长条件，并通过抗生素筛选SP2／0细胞浓度的摸索，确定了组胺醇、霉酚酸联合筛选对SP2／0细胞的最低致死量为3．5mmol／L+1．1ug／“。接着，采用电穿孔转染质粒DNA的方法，将制备好的线性质粒PAH4604+CD4VH和PAG4622+CD4VL共转染SP2／0细胞，通过组胺醇、霉酚酸联合筛选4～6周，获得了0925CASP2／0和l107CASP2／0两株阳性SP2／0细胞株。最后，通过ELISA、流式细胞术、RT-P

4、CR和DNA测序的方法对0925CASP2／0和1107CASP2／0细胞进行了初步鉴定。结果表明，本研究成功地在真核细胞SP2／0中表达了抗人CD4人．鼠嵌合抗体，表达产量为1～2ng／ml。[关键词]：CD4嵌合抗体电穿孔SP2／0细胞真核表达TheEukaryoticExpressionofAnti—humanTLymphocyteCD4Mouse／humanChimericAntibodyAbstractAsakindofsinglechainglycoproteinoncellmembrane

5、surface，CD4belongstoIgsuperfamilyandisalsothemainreceptorofHIV．CD4+Tcellparticipatesinmajorityautoimmunedisease，andanti—CD4antibodycanpurgeorinhibitCD4+Tcell，therebyitcanbeusedtocureautoimmunediseases．ComprehensiVenessandin—depthresearchestowardsmouseori

6、ginanti—CD4monoclonalantibodydesignedtocureautoimmunedisease(e．g．，rheumatoidarthritis，systemiclupuserythematosus，eta1)hasbeenmade[1，2，3，41，andcurativeeffectissatisfactory．Butamajorlimitationtotheapplicationofmouseantibodiesinhumantherapyisthehumananti—mo

7、useantibody(HAMA)response．Repetitivelyusingmouseantibodiesmaycauseallergicreaction，andlowerthetherapeuticeffect．Mouse／humanchimeraantibodycanreducetheHAMAresponsewiththeoriginalantigenbindingcapabilityandlowheterogeneity．Recentclinicalstudiesshowedthatth

8、eantigenicityofchimericantibodieswassimilartootherhumanizedantibodiesandtheaffinityofchimericantibodieswasbeRerthanotherhumanizedantibodies．EndonucleasedigestingandDNAsequencingconfirmedthatthevariableregions(VLandVHgene)o