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《抗人黑色素瘤嵌合抗体真核表达载体构建与表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、冯 蕾等 抗人黑色素瘤嵌合抗体真核表达载体的构建与表达 第4期·247·①抗人黑色素瘤嵌合抗体真核表达载体的构建与表达冯 蕾 韩 骅 (第四军医大学基础部医学遗传与发育生物学教研室,西安710033) 中国图书分类号 R392111 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2005)0420247204[摘 要] 目的:构建嵌合型抗人黑色素瘤抗体的真核表达载体,并实现真核表达。方法:从3株杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因,插入含有抗人Tac抗原信号肽以及人免疫球蛋白κ轻链恒定区基因和γ1重链
2、恒定区基因的真核表达载体pMH2CA中,转染293T细胞,进行嵌合抗体表达,并用RT2PCR、ELISA、Westernblot免疫印迹等对抗体表达鉴定。结果:成功构建了抗人黑色素瘤人2鼠嵌合抗体,并实现其真核表达。RT2PCR证实了该抗体在mRNA水平上的表达,ELISA和West2ernblot证实了抗人黑色素瘤人2鼠嵌合抗体的表达。结论:成功表达了抗人黑色素瘤人2鼠嵌合抗体。[关键词]嵌合抗体;黑色素瘤;基因工程Constructionandexpressionofmouse2humanchimerica
3、nti2humanmelanomaanti2bodyFENGLei,HANHua.DepartmentofMedicalGeneticsandDevelopmentalBilogy,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710032,China[Abstract]Objective:Toconstructeukaryoticexpressionvectorforanti2humanmelanomachimericantibody,andexpresstheantibod
4、yineukaryoticcells.Methods:Variableregionsofthemurineantibodywereclonedfromtheanti2humanmelanomahybridomacelllineHB8459,HB8760,Mel3,andwasinsertedthemintothechimericantibodyeukaryoticexpressionvectorpMH2CA.Theconstructedvectorwastransfectedinto293T,thechimer
5、icantibodywasexpressed,asdetectedbyRT2PCR,ELISA,andWesternblot.Results:Eukaryoticexpressionvectorsofthechimericantibodyagainsthumanmelanomaweresuccessfullyconstructed,andexpressedineukaryoticcells.TheexpressionofchimericgenewasconfirmedbyRT2PCR,specificityof
6、thechimericantibodywasprovedbyELISAandWesternblot.Conclusion:Anti2humanmelanomachi2mericantibodywasexpressedsuccessfully.[Keywords]Chimericantibody;Melanoma;Geneticengineering 黑色素瘤是一种恶性程度很高的肿瘤,早期即疫学教研室惠赠。真核表达载体pMH2CA由本室韩可经淋巴和血液转移。对黑色素瘤的早期诊断和治骅教授构建。PCR引物由Tak
7、ara公司合成。DNA疗一直是人们所关注的问题。HB8759,HB8760,纯化试剂盒购自上海华舜公司。RNA提取试剂,反Mel3为3株分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交转录试剂盒,转染试剂购自GIBCO公司。工具酶及瘤细胞株,对人黑色素瘤细胞有高特异亲和性,有较其他分子生物学试剂来自宝泰克生物工程公司。好的临床应用前景。为降低鼠源性单抗的免疫原112 方法性,避免应用于人体时产生人抗鼠抗体,更适于临床11211 可变区基因的克隆 取对数生长期Mel3,应用。我们采用基因工程技术对鼠源性单抗进行人7HB8759,
8、HB87603株杂交瘤细胞株各10细胞,异硫源化改造,构建了抗人黑色素瘤嵌合抗体的真核表氰酸胍变性法提取细胞总RNA,反转录合成cDNA达载体,转染真核细胞,成功表达了抗人黑色素瘤第一链。根据Orlandi1发表的扩增小鼠可变区基因人2鼠嵌合抗体,为下一步工作奠定了基础。的引物PCR扩增抗体基因的可变区。回收重链大小为360bp,轻链大小为330bp左右的片段,插入T21 材料与方法e
