抗汉滩病毒中和性鼠-人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究

《抗汉滩病毒中和性鼠-人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究：周伟,吴兴安*,罗雯,胡刚,张芳琳,白文涛,张亮,于澜,史梦远,徐志凯【摘要】　　目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MHpCAMBIA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功

2、获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1500bp及800bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。【关键词】汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体　　[Abstract]AIM:ToconstructthetransgenicArabidopsisthalianacontainingfulllengthgeneofmouse/humanchimericantibody(3G1MH)againstHantaanvirus.METHOD

3、S:Therebinantplasmid3G1MHpCAMBIA2301edintoAgrobacteriumtumefaciensGV3101byTSSfreezethaethod,andthentherebinanttransgenicmethod.Theregeneratedtransgenicplantsycin,andconfirmedbyPCRandNorthernblot.RESULTS:PCRresultshoein7stainsofthetransformedplants.Northernblotanalysesconfirmedthetranscriptio

4、nofheavyandlightchainsinthetransgenicplants.CONCLUSION:Thesuccessfulestablishmentof3G1MHtransgenicArabidopsisthalianaplantspavetheericantibody;transgenicplants;plantibody　　肾综合征出血热（hemorrhagicfevere,HFRS）是由汉坦病毒(Hantavirus,HV）感染引起的急性病毒性传染病,流行于世界很多国家和地区。全世界90%以上的HFRS病例发生在我国,疫情非常严重,年发病率超过10万人,且以青壮年

5、居多,死亡率约5%～10%,已成为我国目前死亡人数最多的急性病毒性传染病之一[1]。对于HFRS的治疗,临床上主要是采取血液透析等方法进行对症处理。因此研究开发特异、有效的治疗药物,对于肾综合征出血热的临床治疗具有重要意义。本研究在前期工作的基础上[2],将抗HTNV鼠源性单克隆抗体（mAb)3G1进行人源化改造,并进一步将其转入模式植物拟南芥内表达,以探索一条大规模廉价生产免疫治疗抗体的新途径,为开发新一代特异治疗HFRS的生物制剂奠定基础。　　1材料和方法　　1.1材料E.coliDH5α均由第四军医大学微生物学教研室保存,3G1MHpCAMBIA2301为抗汉滩病毒鼠/人植物

6、表达抗体重组质粒,由第四军医大学微生物学教研室构建;农杆菌GV3101由西安文理学院生命科学系罗雯博士馈赠。限制性内切酶、TaqDNA聚合酶等主要分子生物学试剂购自TaKaRa公司和MBI公司;植物基因组DNA提取试剂盒、植物TotalRNA提取试剂盒为QIAGEN公司产品;地高辛DNA标记试剂盒、地高辛杂交检测试剂盒为依诺金公司产品。　　1.2方法　　1.2.13G1MHpCAMBIA2301质粒转化农杆菌通过TSS冻融法将重组植物表达质粒3G1MHpCAMBIA2301转化农杆菌GV3101感受态细胞[3],涂于含利福霉素(50mg/L)、卡那霉素(50mg/L)的LB选择培

7、养基,阳性菌落提取质粒,HindIII和EcoRI酶切鉴定;同时提取质粒做PCR鉴定,根据抗汉滩病毒鼠人嵌合抗体MHHL基因序列设计引物Ⅰ:5′TCTCCCAAATTCATGTCC3′,3′AGATGCGGACGCTTCAGT5′。用引物Ⅰ进行PCR反应,反应体系:10×PCRBuffer2.5μL,Primer5′1μL,Primer3′1μL,dNTP1μL,MgCl21.5μL,TaqDNAPolymerase0.5μL,质粒DNA1μL,