研究生讲课肿瘤干细胞

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1、肿瘤干细胞高全立河南省肿瘤医院生物治疗科干细胞生物学特性干细胞有自我复制更新能力：通常情况下只有干细胞具有分裂产生子代干细胞的能力干细胞有定向分化为功能细胞能力已经定向分化的细胞一般情况下不能逆转化为干细胞干细胞分类根据来源分类胚胎干细胞成体干细胞根据分化潜能分类：全能干细胞多能干细胞单能干细胞胚胎干细胞培育过程干细胞的再编程核移植如克隆羊多莉细胞融合基因转染：iPSOCT4,SOX2,KLF4,c-MYC小分子化合物诱导：多能干细胞多向分化图横向分化亚全能干细胞？肿瘤的异质性—肿瘤干细胞Reya,T.,etal.Nature.2001.414.105-111肿

2、瘤干细胞的起源由正常干细胞经多基因多步骤突变累积而来由骨髓来源的干细胞与基因发生改变的组织细胞融合而来由基因发生改变已分化的细胞逆转化而来CancerstemcellsshouldbethetherapytargetReya,T.,etal.Nature.2001.414.105-111肿瘤干细胞的特性维持肿瘤生长的基础具有自我更新和多向分化的能力肿瘤组织中含量极低对常用的治疗方法耐药：如化疗、放疗、分子靶向治疗。免疫治疗如何？ABC转运蛋白在肿瘤干细胞多药耐药中的作用ABC转运子示意图(通过水解ATP将多种化疗药物泵出细胞外）肿瘤干细胞的可变性易于转化为间质样

3、细胞，表达许多成纤维细胞的特性非肿瘤干细胞可通过EMT转变为肿瘤干细胞EMT-表皮细胞向间质细胞转化MET-间质细胞向表皮细胞转化肿瘤干细胞的间质细胞学特性EMT（表皮细胞向间质细胞转化）是肿瘤侵袭和转移的主要机制之一，肿瘤干细胞易于侵袭和转移。多个实验证实肿瘤干细胞具有间质细胞的生物学特性。乳腺上皮细胞系通过EMT可产生乳腺癌干细胞。肿瘤干细胞的表面分子标记CD44：乳腺癌，头颈部鳞癌，胰腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，大肠癌CD133：脑胶质瘤，大肠癌，胰腺癌，肺癌，肝癌，恶性黑色素瘤，卵巢癌CD90：肝癌，肺癌CD24：胰腺癌阳性，乳腺癌阴性CD117：卵巢

4、癌CD278：恶性黑色素瘤肿瘤干细胞表面标记与预后CD44：头颈部鳞癌的预后不良标记。乳腺癌中12个研究中的898例meta分析，CD44为预后不良的标记。大肠癌中存在争议。CD133：脑胶质瘤高表达预后差。大肠癌高表达预后差，肺癌有争议。外周血CD133mRNA的表达水平与预后相关（JClinOncol,201129(12):1547-55).肿瘤干细胞高表达胚胎干细胞相关基因Oct4Sox2NANOGKlfBmi1C-Myc胚胎干细胞基因与肿瘤预后的关系Oct4：肺癌及乳腺癌中高表达分化差，预后差Sox2：口腔鳞癌、食管癌高表达预后差，而肺鳞癌中高表达预后良

5、好的指标。NANOG：口腔鳞癌中高表达预后差，大肠癌中的表达与预后无关。c-Myc：与多种肿瘤的预后不良相关。EMT相关基因与肿瘤的预后的关系E-cadherinN-cadherinVimentin尽管存在争议，一些文章支持与肿瘤的预后相关肿瘤干细胞其它功能基因与预后ALDH1（乙醛脱氢酶1）：ALDEFLUOR的试剂来分选ALDH-1阳性细胞。其表达与多种肿瘤的预后明显相关。ABC转运子家族蛋白：MDR1，ABCG2，ABCB5等，其功能与SP细胞相关。其表达于预后的关系不明确。肿瘤干细胞是否存在的争议正常组织的干细胞所占比例很低，而某些肿瘤含有很高比例的肿瘤

6、干细胞。非肿瘤干细胞很容易通过EMT转变为肿瘤干细胞。免疫标记技术抗原抗体反应免疫组化技术基本原理常用酶标抗体间接法免疫组化的优缺点优点：特异性敏感性定位性缺点：假阳性率高设计好对照是关键：阴性对照、阳性对照、自身对照免疫荧光基本原理流式细胞仪的工作原理流式细胞仪流式细胞仪的应用细胞生物学肿瘤些免疫学血液学药物学流式细胞结果分析（散点图）流式细胞分析肺癌干细胞的分离鉴定TUMORSAMPLEDIGESTION:-CollagenaseI37ºC-2hours-WashingSINGLECELLSUSPENSIONCULTURING:Serumfreemedium

7、原代肺癌细胞培养原代培养建立的肺癌细胞系Wehaveestablished5squamouscarcinoma(B),4adenocarcinoma(D),1largecelllungcancer(C),1smallcelllungcancer(A),and1lungcarcinoidcelllines.原代培养的肺癌细胞在NOD/SCID小鼠能形成肿瘤原代培养的肺癌细胞中含有一小群CD44强阳性的细胞Smallcelllungcancer(LC004),largecelllungcancer(LC006)havecd44strongpositivepopula

8、tioncells.CD