广西猪流感病毒分离及全基因序列分析

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1、分类号』丝三：丝UDC硕士学位论文密级玄军编号——广西猪流感病毒分离及全基因序列分析侯韶毅论文答辩日期2Q!Q生鱼旦垒旦．学位授予日期一答辩委员会主席睦童趑巫究员．论文评阅人拯盛硒究员嫠到主推亡硒究员．学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有。除已注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。谳⋯：P敖彻年莎月形日学位论文使用授权说明本人完全了解广西大学关

2、于收集、保存、使用学位论文的规定，即：本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容；按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。请选择发布时间：礅口时发布口解密后发布(保密论文需注明，并在解密后遵守此规定)论文作者签名：严彩旌导师签名：萎伟至励年步月矽日广西猪流感病毒分离及全基因序列分析摘要2008年8月至2010年3月期间，本研究通过收集全区各地疑似猪流

3、感(Swineinfluenza，SI)的临床样品进行病毒分离。应用鸡胚接种和细胞培养共分离到两株猪流感病毒(Swineinfluenzavirus，SIV)，通过对8个片段的全基因克隆及序列分析，证实为H1N2和H1N1亚型SIV。将分离株命名为A／swine／Guangxi／NNGN3／2009(H1N2)(简称GN3株)和A／swine／Guangxi／LBl44／2009(H?N1)(简称LBl44株)。另外，本研究也对本实验室保存的A／swine／Guangxi／LGXl／2006(H3N2)(简称LGXl株)和A／swine／Guan

4、gxi／LGX3／2005(H3N2)(简称LGX3株)进行序列分析。对GN3株和LBl44株各基因关键位点分析，发现GN3株HA基因第190、220、225、226、228位(H3亚型HAl位置)氨基酸残基分别为D、R、D、Q、G，表明其可与SAQ-2，6-Gal受体结合；在HA裂解位点只有单个R，不具备高致病性毒株HA序列特征；PB2基因第627、701位分别为E、D；PBI-F2为34个氨基酸组成的截短多肽；NSI第92位为D，且不具备PDZ配体功能域序列，这些都说明GN3株为低致病性SIV。耐药性基因位点中，NA基因l19E、274H、2

5、92R、294N和M2基因31S，表明GN3株对神经氨酸酶抑制类、M2离子通道作用类抗病毒药物依然敏感。LBl44株PB2基因627E、701N；NSI基因的PL基序(GPKV)都表明其为低致病性SIV。耐药性基因位点中，NA基因119E、274Y、292R、294N和M2基因31S，表明LBl44株已对奥司他韦产生耐药性，但依然对M2离子通道作用类抗病毒药物依然敏感。系统发育进化与核酸同源性分析结果显示，GN3株为“人一猪一禽"三源重配SIV，且具有类似于北美地区三源重配SIV的TRIG(Triplereassortantinternalgen

6、e，TRIG)盒，其基因来源情况为：PB2和PA基因来源于北美禽源谱系；PBl基因来源于北美“三重配SIV株"人源谱系；HA、NP和M基因来源于古典HINI猪源谱系；NA来源于H3N2人源谱系；Ns来源于三重配猪源谱系。GN3株分别与Sw／Gx／13／06和Sw／Hainan／I／05保持较高的亲缘性，并与香港分离株Sw／HK／NS623／02关系最密切。而LBl44株PB2、NP、NA、M和NS基因都来源于欧洲类禽谱系，证实了LBl44株为欧洲类禽N1亚型SIV。LGXl株和LGX3株8个基因片段来源于人源谱系，证实LGXI株和LGX3株为近期

7、类人H3N2SIV。关键词：猪流感病毒病毒分离全基因克隆序列分析系统发育进化分析ⅡISOLATIONANDPH『YLOGENICANAI．YSIS0FSⅥ厂INEINFLUENZAⅥRUSINGUANGⅪABSTRACTDuringAugust2008toMarch2010，clinicalsamplesofsuspectedswineinfluenza(SI)werecollectedforvirusisolationinthisresearch．Twoisolates，A／swine／Guangxi／NNGN3／2009(H1N2)andA／

8、swine／Guangxi／LB144／2009(H?N1)(abbreviatedtoGN3virusandLB144virus，re