miR1792在食管癌中作用机制的初步研究

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1、中国协和医科人学中国医学科学院博士研究生学位论文图表索引图I．1miRNA的合成机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4图lm／R一17-92基因簇在食管癌标本和细胞系中的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33图2pcDNA3和pGL3-Control图谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34图3pcDNA3／miR．17．92克隆构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35图4miR．17-92稳定表达细胞株的鉴定及生长曲线的绘制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35图5miR—J7-92促进细胞在裸鼠体

2、内的成瘤能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37图6miR．J『7-92基因簇的定位及组成成员⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38图7TaqMan探针法检测七个食管癌细胞系中属于miR．J7．卯基因簇的五个miRNAs的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38图8MTr法检测利用反义寡核苷酸抑制食管癌细胞中属于miR．17-92基因簇中五个miRNAs的生长作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40图9EC9706细胞属于m／R一17-92基因簇的五个miRNAs的表达情况⋯⋯⋯⋯4

3、1图10TUNEL法检测反义寡核苷酸抑制内源性m／R一19a诱发的细胞凋亡⋯⋯⋯42图1l流式细胞仪法检测反义寡核苷酸抑制内源性m／R一19a诱发的细胞凋亡⋯⋯43图12Westemblot检测蛋白变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44图13凋亡基因芯片370个基因的散点图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46图14凋亡基因芯片mRNA水平上上调两倍以上的基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47图15RT-PCR法检测TNF3'UTR的表达差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47图16miR．19ase

4、nsor的构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48图17pGL3一Control／TNF3’UTR的克隆与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49图18TNF3’UTR报告基因实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50图19加识一19a结合位点突变的TNF3’UTR报告基因实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5l图20原位杂交法检测食管癌标本中m／R—J7．助的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53中国协和医科人学中国医学科学院博：}：研究生学位论文图表索引图21TaqMan探针法检测miR．17-92稳定

5、表达细胞株miRNAs表达情况⋯⋯⋯55图22miR一17-92基因簇的组成及其旁系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57图II·1pcDNA4．EBl克隆构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82图II．2四环素诱导表达系统的原理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83图II．3EBl诱导表达系统的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯84图II．4诱导表达EBl可加快细胞生长⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯85图II一5软琼脂集落形成实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯86图

6、II．6裸鼠致瘤实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯87图II-7EBl可促进p-catenin的核累积激活D-catenin／TCF的转录活性⋯⋯⋯⋯88图II-8EBl可上调c-Mye、cyclinD1和Bcl．2的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯89图II-9EBl可促进c-Myc的转录活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90图II．10Hoechst染色⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9l图II一11TUNEL染色⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92图I

7、I-12EBl上调Bcl一2依赖c—Myc的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93表I．1MicroRNA与肿瘤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5表1miR一17-92基因簇在食管癌标本中的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34表2miR一17-92稳定表达细胞株的裸鼠致瘤实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37表II．1EBl可促进293．TR在裸鼠体内的成瘤能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯87V中国协和医科大学中国医学科学院博：Ij研究生学位论文英文缩略词ADAIBlAIDAIPBadBak

8、BaxBCl．2BICBikBimBIRCBSACARDcaspaseCLLCt矿CytCDLBCLDMSODISCEMTEndoGESCCFACSFADDHoXDl0HSCsLNAMETmiRNAmIⅢA英文缩略词Alzheimer’Sdiseaseamplifyiedinbreastcancerlactivation．inducedcytidinedeaminaseApoptosis—inducingfacorBcl·-xl／Bcl··2associateddea