核仁素在血管新生中的作用及其机制初步探讨

《核仁素在血管新生中的作用及其机制初步探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号＆三鱼三UDC61O硕士学位论文学校代码!Q三三三密级公珏核仁素在血管新生中的作用及其机制初步探讨TheRoleofNucleolininAngiogenesisandItsUnderlyingMechanisms作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：昌IJ指导教师：陈岸兰病理学与病理生理学心血管病理生理基础医学院肖献忠教授王慷慨副教授论文答辩日期堡!三：三：!答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得

2、的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：：强崖兰日期：垫缝年鱼月丝日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存

3、学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。本课题受以下基金资助：1．国家自然科学基金面上项目(81270201)：细胞内核仁素对VEGF介导的血管生成的影响及机制研究。基金主持人——王慷慨副教授。2．湖南省自然科学基金重点项目(11JJ2047)：核仁素在缺血预适应保护中的作用及其机制研究。基金主持人——王慷慨副教授。核仁素在血管新生中的作用及其机制初步探讨摘要：血管新生是一个复杂的生物学过程，但其具体机制目前尚未完全

4、明了。核仁素是一种具有多种生物学功能，在真核生物中高度保守的核仁磷酸蛋白，也是一种重要的RNA结合蛋白，具有在核仁、胞核、胞浆，甚至细胞膜表面穿梭的特性。大量研究表明，细胞膜表面核仁素参与血管新生的调节。然而，核仁素的RNA结合特性在血管新生中有何作用，目前仍不清楚。本研究在明确核仁素对血管新生起调节作用后，拟初步探讨其RNA结合特性在血管新生中的作用及其可能的机制。本实验首先通过建立小鼠心肌缺血模型，利用免疫组化和免疫荧光技术观察血管新生和核仁素的表达，并采用PCR和WesternBlot技术

5、检测血管新生相关基因和核仁素的表达。其次，在细胞水平，建立VEGF诱导人脐静脉内皮细胞(rajvzc)发生细胞迁移和管型形成的模型，采用增加和降低核仁素表达的研究手段，探讨核仁素在VEGF诱导内皮细胞迁移和管型形成中的作用；同时利用PCR和WesternBlot技术观察血管新生相关基因的表达情况。最后利用蛋白质．RNA免疫共沉淀技术探讨血管新生中核仁素可能调控的相关靶基因，以阐明核仁素在血管新生中发挥作用的可能机制。主要实验结果如下：1．整体动物实验。(1)免疫组化和免疫荧光分析发现：心肌缺血后

6、15天，缺血组心肌组织中核仁素和血管内皮钙粘蛋白表达升高，与假手术组比，具有统计学意义。(2)PCR和WesternBlot技术检测显示：缺血组心肌组织中核仁素和血管新生相关基因表达升高，与假手术组比，差异具有统计学意义。(3)HE染色显示核仁素转基因小鼠血管密度明显增高，免疫组化、PCR和WestemBlot技术检测显示血管新生相关基因表达升高，与野生型小鼠相比，差异具有统计学意义。2．细胞实验。(1)PCR和WestemBlot技术检测显示VEGF可诱导HUVEC核仁素表达升高，并在一定程度

7、上呈时间和浓度依赖性。III(2)核仁素过表达能促进VEGF诱导的HUVEC发生细胞迁移和管型形成；反之，siRNA介导的核仁素低表达则能抑制VEGF诱导的HUVEC发生细胞迁移和管型形成。(3)生物信息学分析显示多个血管新生相关基因如VE．cadherin，Tie．2，MMP9，Endoglin，COX43等的mRNA含有一个或多个核仁素的结合元件。(4)PCR和WesternBlot技术检测显示siRNA介导的核仁素低表达能抑制血管新生相关基因的表达。(5)利用蛋白质．RNA免疫沉淀技术，发

8、现核仁素与血管新生相关基因MMP9，Endoglin，integrinQV有相互作用。本实验可得出如下结论：1．C23能促进血管新生。2．C23的RNA结合特性可能参与了VEGF介导的血管新生。图21幅，表2个，参考文献46篇。关键词：核仁素；血管新生：血管内皮生长因子；管型形成；内皮细胞钙粘蛋白分类号：R363IVTheRoleofNucleolininAngiogenesisandItsUnderlyingMechanismsAbstract：Angiogenesisisacomplexbi