栉孔扇贝免疫系统发生及母源免疫的初步研究

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1、ByFengYueADissenatiOnSubmittedtoTheUniVersit)rofChineseAcademyofSciencesIⅡpartialfumUmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceInsitituteofoceanology，ChineseAcademyofScienceApril，2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，

2、均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：荔斧日期：2彬绎矧学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签字：磊呤日期：2。侈中莎厅丑凋导师签字：害幸事易日期：y／歹·r，扣久I致谢本论文是在导师宋林生研究员的悉心指导和亲切关怀下完成的。从论文

3、的选题、实验方案的设计到研究工作的开展和论文的撰写都凝聚着导师辛勤的汗水。宋老师高尚的品德、渊博的学识、活跃的思维、精辟的见解、严谨的治学态度、刻苦的钻研精神、忘我的工作热情，永远是我学习的楷模。在此谨向宋老师表示最衷心的感谢和最崇高的敬意。感谢本实验室王玲玲、周智老师在实验思路、论文撰写和工作方法上的启迪。感谢邱丽梅老师、张垣老师、王孟强老师、刘瑞老师在实验过程中的指导和大力帮助。实验室充满活力而又团结奋进的团队为我研究工作的顺利开展提供了良好的环境。衷心感谢实验室史晓委、杨传燕、Vinu、孙志斌、王晶晶、王雷雷、高扬、孙瑞、马兆鹏、蒋秋芬、衣启麟、黄萌萌、张涛、张道翔、孙鑫和孙颖

4、等同学三年来对我的热情关怀和无私帮助，你们的帮助是我论文顺利完成的保证，与你们共同奋斗、共同进步、共同收获的日子是我一生永远难忘的精彩篇童。感谢中科院海洋所开放室高强老师、邓涪老师、邓田老师为本研究提供的便利条件，感谢研究生部各位老师给予我的支持和帮助。感谢中国海洋大学包振民教授及其课题组在实验过程中给予我的热情指导和帮助。特别感谢我的父母，你们对我始终如一的支持帮助和给予我的无私付出和真切期盼，永远是我坚定信心、克服困难、勇攀高峰的动力源泉!衷心的祝愿你们永远健康平安!感谢我亲爱的妻子张灵燕多年来对我的关爱、理解和支持，我们携手走过和将要走过的每一天都是我一生中最宝贵的财富。最后，

5、对所有在生活、学习和工作中关心、帮助和支持我的人表示诚挚的感谢。岳峰2013年4月于青岛摘要栉孔扇贝免疫系统发生及母源免疫的初步研究栉孔扇贝是我国重要的海水养殖优势品种之～。然而近年来养殖病害频发，特别是扇贝育苗期间苗种的病害问题，严重制约着扇贝养殖业健康持续的发展。从个体发育早期免疫系统入手，深入研究扇贝免疫系统发生与发育的调控过程及母源免疫的作用机制，探讨提高扇贝苗种免疫力的有效方法和途径，创新苗种养殖方式，是保障扇贝养殖业健康持续发展的重要途径。本论文以栉孔扇贝为研究对象，采用分子生物学和免疫学技术，分析了扇贝造血相关转录因子的结构和功能及其与免疫分子在扇贝早期发育中的时空表达

6、模式，初步探讨了扇贝免疫系统发生过程；并研究了母源免疫分子的传递及传代免疫效应，揭示了母源免疫及其传代效应在扇贝发育早期免疫防御中的重要作用。1．栉孔扇贝造血相关转录因子结构和功能的鉴定与分析克隆获得栉孔扇贝造血相关转录因子C瓜unt、cfCB邛和C船ATA基因的cDNA序列。它们分别含有保守的mnt同源结构域、cBFbeta结构域和两个ZnFGATA锌指结构域，分别属于mnx、CB邱和GATAl23家族成员。体外重组蛋白C瓜unt和C硒ATA均能与特异DNA基序相结合，而CfCBFB能够显著促进c瓜unt的DNA结合活性。鳗弧菌刺激后，栉孔扇贝循环血细胞数量在6h时显著下降至最低值

7、，48h时与对照组差异不显著：丽C侬unt和c疋BFBmIⅢA的表达分别于6．48h和6．96h显著上调，C船ATAmRNA表达于6．12h时显著下调。C依unt和C硒ATA基因干扰能够引起栉孔扇贝血细胞新生率和循环血细胞数量的显著下降。在c侬unt基因干扰后，LPS刺激能够显著诱导c侬untmI矾A表达，并且血细胞新生率及循环血细胞数量均显著升高；而C船ATA基因干扰后，LPS刺激未能引起C硒ATAmRNA表达、血细胞新生率及循环血细胞数量的显著变化。以