急性坏死性胰腺炎发病机制中核因子—κB活化作用的实验研究

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1、中国医科大学博士学位论文急性坏死性胰腺炎发病机制中核因子—κB活化作用的实验研究姓名：龙锦申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：郭仁宣2003.4.1急性坏死性胰腺炎发病机制中核因子一KB活化作用的的实验研究中文摘要目的急性坏死性胰腺炎(acutenecrotizingpancreatitis，ANP)发病凶险，病死率高，早期最严重的并发症是出现多器官衰竭。早期出现多器官衰竭是ANP的主要死因。胰酶激活、细胞因子、内毒素、氧自由基以及花生四烯酸代谢产物被认为在ANP发病机制中起重要作用，但ANP的发病机制仍需进一步研究。核因子一KB(nuclearfacto

2、r—kappaB，NF—KB)是Rel转录调节蛋白质家族的一员，包括p50、p52、p65、c—Rel、RelB等。NF—KB存在于细胞质以同源或异源二聚体形式与IKB结合而无活性，但某些刺激信号可以使IKB降解，NF—KB活化。NF—KB进入细胞核中与多种基因启动子的KB位点结合。因为NF—KB调节多种炎症基因如肿瘤坏死因子(TNF)一d、白细胞介素(IL)一6、8和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iN—Os)的表达，也因为这些基因在ANP时高表达，参与了ANP的发病，NF—KB可能在ANP发病机制中起作用。自1

3、988年，Furchogott等发现血管内皮细胞产生的内皮衍生舒张因子的本质是一氧化氮(nitricoxide，NO)以来，NO的研究受到了广泛的重视。NO在ANP中的作用已为国内外学者所瞩目。越来越多的研究表明，NO在ANP的发病过程中起到关键性的作用。奥曲肽(善宁)是一种半合成的生长抑素的类似物，主要应用于ANP的治疗。一般认为奥曲肽治疗ANP的显著疗效与抑制胰酶、消化液的分泌有关。奥曲肽的生理活性和对胰酶的分泌作用及其在治疗ANP中的作用一直被深入研究。尽管多数的临床和实验研究认可奥曲肽的治疗作用，但仍有相反观点。本研究通过大鼠ANP模型，观察NF—KB

4、活化在ANP发病机制中的作用，NF—KB活化对ANP中NO等氧自由基的作用，奥曲肽在ANP发病机制中对NF—KB活化的作用。方法ANP模型制备：雄性Wistar大鼠，体重250—3009。0．001ml／g体重胰管内缓慢匀速注人5％牛磺胆酸钠建立ANP模型。对照组，胰管内缓慢匀速注入等量生理盐水。实验第一部分，实验动物随机分成三组：对照组、ANP组、ANP+NF—KB抑制N-硫代氨基己酸吡咯烷(PDTC)组。PDTC组，ANP模型制备后，尾静脉注入PDTC0．01mg／g。各组动物分别在模型制备后3、6、12小时，分批腹主动脉取血，切取胰腺，每时点10只。检测

5、血清淀粉酶的变化，胰腺组织病理改变以及免疫组化观察NF—KB抑制蛋白IKBot、NF—KB在胰腺组织的表达。实验第二部分，实验动物随机分成三组：对照组、ANP组、ANP+PDTC组。各组动物分别在模型制备后6小时，腹主动脉取血，切取胰腺，每组10只。检测血清淀粉酶、NO、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化，胰腺组织病理改变以及免疫组化观察iNOS在胰腺组织的表达。原位杂交检测NF—KBp65mRNA在胰腺组织的表达。实验第三部分，实验动物随机分成三组：对照组、ANP组、ANP+奥曲肽组。奥曲肽组，ANP模型制备后，尾静脉注入奥曲肽o．01仙g／g

6、。各组动物分别在模型制备后6小时，腹主动脉取血，切取胰腺，每组10只。检测血清淀粉酶、NO、一氧化氮合酶(NOS)的变化，胰腺组织病理改变以及免疫组化观察iNOS在胰腺组织的表达。原位杂交检测NF—KBp65mRNA在胰腺组织的表达。结果1．血清淀粉酶的变化：ANP组血清淀粉酶迅速升高，12小时达到最高水平(8131．504-883．97U／L)。而PDTC组、奥曲肽组虽仍明显高于对照组，但明显低于ANP组(P

7、5±9．04umol／L，P<0．05)。奥曲肽组虽然高于对照组，但也低于ANP组(65．18±9．02umol／LVS96．95±9．04umol／L，P<0．05)。ANP组NOS升高，奥蓝肽组虽然高于对照组(P<0．05)，但也低于ANP组(38．46±4．25U／mlvs32．04±4．73U／ml，P<0．05)。3．MDA、SOD的变化：ANP组、PDTC组MDA均明显高于对照组(P<0．05)，ANP组高于PDTC组，但两组之间无显著差异。ANP组、PDTC组SOD均明显低于对照组(P<0．05)，ANP组低于PDTC组，但两组之间无显著差异。4

8、．大鼠胰腺组织的病理变化：ANP组、P