甘草酸二铵对COPD大鼠肺组织NFκB的影响

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1、甘草酸二铵对COPD大鼠肺组织NF-κB的影响作者：卜丽梅刘芬曲洪源巩继涵石卓华树成【摘要】目的探讨甘草酸二铵(DGPS)对实验大鼠COPD的治疗作用其作用机制。方法采用给实验大鼠被动吸烟和气管内注入脂多糖相结合的方法，诱导建立大鼠COPD模型。将实验动物按体重随机分为3组：空白对照组、模型组、DGPS治疗组。放射免疫法测定各组大鼠血清中透明质酸(Hyaluronan,HA)和层黏连蛋白(Laminnin,LN);液相竞争法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色法检测NF-κB阳性细胞数，Western印迹测定NF-κBp50蛋白的表达;观察

2、肺组织结构的大体变化及光镜下改变。结果DGPS明显降低血清HA、LN、TNF-α的水平，与模型组相比有统计学意义(P<0.05);DGPS组肺组织NF-κBp50的阳性细胞数减少和NF-κBp50蛋白表达下调。结论DGPS可抑制细胞因子的产生，从而保护残存肺细胞发挥抗COPD作用;并通过下调NF-κBp50蛋白的表达，减少炎症介质的释放，发挥抗炎作用，减轻肺损伤程度。【关键词】慢性阻塞性肺疾病;甘草酸二铵;透明质酸;肿瘤坏死因子-α;NF-κB9　目前研究认为慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制与肺部的蛋白酶和抗蛋白酶失衡，氧化和抗氧化失衡，实质和

3、肺血管的慢性炎症有关〔1〕。由于以上原因导致了气道的慢性损伤以及不完全修复过程，以致气道结构和功能改变，即气道重塑，这是COPD不可逆气流受限的主要原因〔2〕。进一步可发展成慢性肺源性心脏病或慢性呼吸衰竭。甘草酸二铵(DGPS)，具有抗炎、抗过敏、抗变态反应、抗生物氧化及免疫调节等多方面功能〔3〕。具有较高的亲脂性，易与体内受体蛋白及类固醇激素靶细胞结合，产生糖皮质激素样的药理作用〔4〕。DGPS在COPD中的抗炎、抗过敏、抗变态反应作用，可抑制气道黏液分泌，降低气道阻力，达到治疗COPD的目的。本文主要采用给实验大鼠被动吸烟和气管内注入脂多糖相结合的方法

4、建立大鼠COPD模型，然后通过血清放免法、免疫组化、Western印迹、光镜等多种方法，从整体水平研究DGPS对COPD的作用及其机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物、药品、试剂与仪器健康雄性Wistar大鼠30只，体重(200±20)g。购自吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(吉)2005-0001。生命源牌过滤嘴香烟，长春烟草有限责任公司出品;脂多糖，Sigma公司;DGPS注射液，连云港正大天晴制药有限公司，批号:20040502;分析天平日本;IX51型倒置显微镜，日本OLYMPUS;微量移液器，上海求精公司;GAMAⅡγ9计数

5、器，瑞士KONTRON;有机玻璃烟熏箱，吉林大学基础医学院药理实验室自制;OPTI血气分析仪，AVLScientific公司;LDZ5-2型离心机，北京医用离心机厂。肿瘤坏死因子(TNF)-α试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所，批号:010349;层黏连蛋白(LN)放免试剂盒，上海海研医学生物技术有限公司，批号:261427;透明质酸(HA)放免试剂盒，上海海研医学生物技术有限公司，批号:220021。　　1.2实验分组及模型制备将30只大鼠实验室饲养2天稳定后，将大鼠随机分为(1)空白对照组：正常饲养，第16日开始每日腹腔注射生理盐水(0.5ml/1

6、00g)，1次/d，持续30d;(2)模型组：第1、16天气管内注入LPS各一次。具体方法：将10%水合氯醛溶液(0.035mg/kg)经腹腔注射，麻醉模型组大鼠，麻药生效后，将大鼠仰卧位固定在操作台上，暴露喉头，以静脉穿刺针代替气管插管行气管插管，插管后按体重以LPS(20mg/kg)为标准，在第1，16天各向大鼠气管内注入LPS1次，然后将大鼠直立旋转并轻拍其背部，使溶液均匀分布在肺部。之后15d内，将大鼠放入自制70cm×60cm×50cm有机玻璃箱内被动吸烟，4支/次，30min/次，1次/d。在造模第16日开始每日腹腔注射生理盐水(0.05mg/

7、kg)，1次/d，持续30d;(3)DGPS组：前15d同模型组。并在造模第16日开始每日腹腔注射DGPS溶液(12.5mg/kg)，1次/d，持续30d。　　1.3DGPS对COPD大鼠血清中HA、LN、TNF-α含量的影响实验结束后，将大鼠麻醉固定，腹主动脉采血，30009r/min离心取血清，采取放射免疫分析法，按照试剂盒说明书操作测HA、LN及TNF-α。　　1.4免疫组化染色法检测肺组织NF-κBp50的阳性细胞数和Western印迹测定NF-κBp50蛋白表达。　　1.5肺组织形态学观察给药结束后第2天(总第45天)，称重，腹腔注射10%水合氯

8、醛(0.03ml/kg)。大鼠麻醉后，迅速开胸取出心肺，分离肺脏，