拟南芥鸟苷酸交换因子RopGEF48基因表达及其响应ABA信号的初步分析

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1、GENEEXPRESSIONP厶汀TERNoFGUANINENUCLEOTIDEEXCHANGEFACTORSRopGEF4／8IN4R4脚DRS硌ANDTHERESPoNSEToABASIGNALINGBySongHongdiTheDissertationSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityInPartialFulfdlmentoftheRequirementsForMasterDegreeofScienceSupervisedbyProfessorZhangWenhuaCompletedinJune2012原创性声明本人郑重

2、声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者c需亲笔，签名：界让矛硼y年‘月t日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

3、复制手段保存和汇编学位论文。／保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密妣(请在以上方框内打“√”)学位论文作者(需亲笔)签名：驯一嵫：专尿钆寿勿乡伊P年∥月1-日叫癀名其r日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：IA】BSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯III符号及缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。V第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11RopGEFs的结构和功

4、能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1RopGEFs的发现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2RopGEFs的结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3RopGEFs调节ROP的机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．4RopGEFs的生理功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62脱落酸(ABA)的生理功能和信号转导机制进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82．1ABA的生理作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．2ABA信号转导机制研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第二章拟南芥中RopGEF4／8基因表达模式的分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。131材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．1植物材料和培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．2质粒和菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．3实验试剂和药品⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．4Trizol法提取拟南芥各组织总RNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．151．5荧光定量qRT-PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．161．6拟南芥叶片

6、DNA小量制备方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．7RopGEF4和RopGEF8启动子的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．8RopGEF4和RopGEF8启动子产物回收和T载体连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191．9大肠杆菌DH5a热激感受态细胞的制备及转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191．10大肠杆菌中质粒DNA的小量提取(碱裂解法)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．201．11菌落PCR、酶切鉴定阳性菌株并测序保菌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．12农杆菌C58C1电击感受态的制备和转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211．13拟南芥的转化与筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221．14GUS报告基因的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．15RopGEF4基因克隆和与GFP瞬时表达载体的连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．231．16质粒的大量提取和纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯241．17拟南芥叶肉原生质体的制备和PEG转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25拟南芥鸟苷酸交换因子RopGEF4／8基因表达及其响应ABA信号的初步分析1．18激光共聚焦观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯