动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书中文版主要

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1、动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物硬组织线粒体粗提分离试剂是一种旨在从动物硬组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物硬组织（心脏或肌肉）的线粒体的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品最佳。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的

2、技术方法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升酶解液（ReagentF）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和酶解液（ReagentF）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保

3、证12月用户自备15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备操作的容器1.5毫升离心管：用于保存线粒体的容器4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞1实验步骤一、组织匀浆法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（注意：实验前最好

4、使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）4．（选择步骤）小心抽去清理液（ReagentA）5．即刻用刀片切碎组织6．放进一个预冷的15毫升锥形离心管7．加入预冷的xx毫升酶解液（ReagentF），充分混匀8．放进冰槽里孵育3分钟9．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g10．小心抽去上清液11．加入预冷的xx毫升清理液（ReagentA）和xx毫升净化液（ReagentC），充分混匀12．放进4℃台式离心机

5、离心2分钟，速度为1000g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器17．在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项7）18．将所有组织匀浆物移入预冷的15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放入4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此

6、步骤获得线粒体沉淀物（注意：如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去）23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里保存二、化学处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解

7、液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。21．手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（注意：实验前最好使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）4．（选择步骤）小心抽去清理液（ReagentA）5．移入到一个液氮冻存管6．即刻放进液氮罐过夜7．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）8．放进一个15毫升锥形离心管9．

8、加入预冷的xx毫升酶解液（ReagentF），充分混匀10．放进冰槽里孵育3分钟11．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g12．小心抽去上清液13．加入预冷的xx毫升清理液（ReagentA）和xx毫升净化液（ReagentC），充分混匀14．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g15．小心抽去上清液16．加入预冷的xx毫升裂解工作液17．涡旋震荡5秒，充分混匀18．在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次19．加入预冷的xx微升强化液（Reagen