试剂盒产品说明书中文版主要用途

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1、组织胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性酶连续循环光谱法定量检测试剂是一种旨在使用胱硫醚-β-合成酶、赖氨酸脱羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶连续循环法反应系统中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用光谱法测定其氧化后峰值（NADH浓度）的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。

2、其适合于各种动物和人体组织裂解悬液等胱硫醚-β-合成酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS；EC4.2.1.22），又称为β-硫解酶（β-thiolase）或半胱氨酸合成酶（cysteinesynthase），属于水解酶（hydrolyase）家属中的一员，作用于硫代谢中转硫通路（transsulfurationpathway）或胱氨酸（cysteine）代谢的第一步。在辅因子磷酸吡哆醛（PyridoxalP

3、hosphate）和S-腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine；adoMet）的帮助下，催化将同型胱氨酸（homocysteine）转化为胱硫醚（cystathionine）的反应。人体胱硫醚-β-合成酶为四体蛋白，551氨基酸。但心脏、肺、睾丸、脾脏不具有胱硫醚-β-合成酶活性。其基因突变引起胱硫醚-β-合成酶缺失，将导致高胱氨酸尿症（homocystinuria），一种高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia；HHC）；而胱硫醚-β-合成酶异常高度表达，为唐氏综合症的特征之一。基于底物丝氨酸（serine

4、）和半胱氨（cysteamine），受到胱硫醚-β-合成酶的水解，进而通过赖氨酸脱羧酶（Lysinedecarboxylase；LDC）、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（phosphoenolpyruvatecarboxylase；PEPC）和苹果酸酸脱氢酶（malatedehydrogenase；MDH）反应系统中，由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），所产生的峰值变化

5、（340nm），来定量分析胱硫醚-β-合成酶的活性。其反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升酶促液（ReagentD）微升反应液（ReagentE）微升底物液（ReagentF）微升阴性液（ReagentG）微升产品说明书1份保存方式1保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；底物液（ReagentF），避免光照，有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器微型台式离心机：用于样

6、品制备培养箱：用于反应孵育200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光谱分析的容器分光光度仪或酶标仪：用于光谱分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentF）注意避光；缓冲液（ReagentC）室温下预热。然后进行下列操作。一、样品准备1．手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）清洗1次4．移入到一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉

7、末状（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx微升裂解液（ReagentB）9．转移到预冷的1.5毫升离心管10．强力涡旋震荡30秒，充分混匀11．置于冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）12．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）13．小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管14．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS300

8、30.1）15．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、测定准备1．准备好上述待测样品，置于冰槽里2．设定好分光光