全血线粒体dna萃取试剂盒产品说明书中文版

《全血线粒体dna萃取试剂盒产品说明书中文版》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）主要用途全血线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过化学溶解纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理获得线粒体，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物血细胞中的线粒体核酸成分处理。用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR分析等。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的最重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。线粒体DNA的分

2、离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。产品内容溶血液（ReagentA）　　毫升清理液（ReagentB）　　毫升裂解液（ReagentC）　毫升净化液（ReagentD）　毫升强化液（ReagentE）　毫升保存液（ReagentF）　毫升破膜液（ReagentG）　毫升去干扰液（ReagentH）　微升酶解液（ReagentI）　微升萃取液（ReagentJ）　毫升浓缩液（ReagentK）　毫升助沉液（ReagentL）　微升沉淀液（ReagentM）　毫升纯化液（ReagentN）　毫升缓冲液（ReagentO）　毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentD）

3、、去干扰液（ReagentH）、酶解液（ReagentI）、萃取液（ReagentJ）和助沉液（ReagentL）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备41.5毫升离心管：用于核酸操作的容器15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备的容器50毫升锥形离心管：用于血细胞处理的容器涡旋震荡仪：用于混匀4℃微型台式离心机：用于沉淀细胞和核酸4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞58℃恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤一、白细胞分离实验开始前，室温预热血溶液（ReagentA），同时4℃预冷清理液（ReagentB）。然后进行下列操作。1．准

4、备2个无菌的50毫升锥形离心管2．轻轻混匀新鲜的EDTA抗凝的全血样品3．分别移出5毫升全血样品到每个50毫升锥形离心管4．分别加入　　毫升室温预热的血溶液（ReagentA）5．轻轻上下倾倒离心管5次，确保充分混匀6．室温下（25℃）孵育4分钟，期间轻轻上下倾倒离心管数次（注意：肉眼可以观察到血液颜色由不透明红色到清澈红色的变化）7．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g8．小心抽掉上清液，留下500微升液体，以防抽掉白细胞颗粒群9．用手指轻弹离心管2至3下，使白细胞颗粒群松动10．分别加入　　毫升预冷的清理液（ReagentB），混匀细胞11．2管50毫升锥形离心管合并为1

5、管12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入　　毫升预冷的清理液（ReagentB），混匀细胞15．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g16．小心抽去上清液，确保没有液体残留（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）二、白细胞线粒体分离实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentD）冻融，然后移出　　毫升净化液（ReagentD）和　　毫升的裂解液（ReagentC）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作，根据用户要求选择其中一种方法：方法一：细胞匀浆法1．加入预冷的　　毫升裂解工作

6、液41．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群2．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器3．在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20至40下）（注意：参见注意事项11）4．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管5．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g6．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞7．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g8．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物方法二、化学处理法1．加入预冷的　　毫升裂解工作液2．涡旋震荡5秒，充分混匀3．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒4．加入预冷的　

7、　微升强化液（ReagentE）5．涡旋震荡5秒，充分混匀6．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项12）7．加入预冷的　　毫升保存液（ReagentF），用手指轻弹混匀8．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g9．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞10．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g11．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物一、DNA萃取1．加入　　微