全血、培养细胞dna试剂盒(5次)说明书

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1、杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路2号H座2601邮编：310030电话：0571-56011203传真：0571-87983751全血/培养细胞DNA试剂盒说明书产品组成全血/培养细胞DNA小量试剂盒Cat.No.5次制备3002005核酸纯化柱2ml离心管蛋白酶K贮存液BufferSLBufferWA（浓缩液）BufferWB（浓缩液）BufferTE说明书5个5个120µl1.2ml1.9ml1.5ml1.2ml1份产品储存与有效期1．蛋白酶K贮存液请置于-20℃保存。2．其他试剂与物品如果储存于室

2、温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上（2~8℃储存的产品使用前应先产品恢复到室温后再使用）。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：400-0099-857。产品介绍本产品适合从≤200µl新鲜的或者是冷冻贮存的全血中分离纯化总DNA；也可以从≤5×106培养细胞中分离纯化总DNA。全血标本或细胞经蛋白酶K消化后释放DNA，添加乙醇促使DNA结合到纯化柱上，降解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去，DNA经Bu

3、fferWA和BufferWB洗涤后，用BufferTE洗脱，即可用于各种分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1．无水乙醇2．1.5ml离心管和移液器及吸头（为避免样品间的污染，请选用含有滤芯的移液器吸头）3．一次性手套及防护用品和纸巾4．台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）5．水浴锅和旋涡震荡器6．可能需要PBS溶液使用前准备1.如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。2.将水浴锅温度设置到56℃，并将BufferTE温育至56℃。3.根据试剂瓶标签上的指示在BufferWA和BufferWB中加入无水乙醇

4、，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.1杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路2号H座2601邮编：310030电话：0571-56011203传真：0571-87983751从全血中纯化DNA操作步骤：1.在1.5ml离心管中加入20µl蛋白酶K贮存液，再加入200µl全血。*如果从少于200µl的全血中纯化DNA，补加PBS溶液使标本达到200µl。*如果从含有有核的红细胞的血液（比如鸟类全血）中提取DNA，则应将

5、全血减少至5~10µl，并补加PBS溶液使标本达到200µl。2.加入200µlBufferSL，旋涡振荡约15秒混匀。*如果从新鲜的全血中纯化DNA，通常会将全血中的RNA一起分离纯化出来，但是RNA的存在并不影响PCR相关的实验。如果要除去RNA污染，可在本步骤中补加4µlRNaseA储存液（100mg/ml，本试剂盒不提供）。*不要将蛋白酶K直接加入到BufferSL中。4.将离心管置于56°C水浴10分钟。低速离心数秒使管盖上的溶液沉降到管底。5.加入200µl无水乙醇，温和地翻转4~6次混合均匀。低速离心数秒使管盖上的溶液沉降到管

6、底。6.吸取步骤5中的溶液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，12000rpm离心30秒。*注意不要将溶液沾到纯化柱管口的边缘上，以免后续的洗涤步骤不能洗净纯化柱。7.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入500µlBufferWA,盖上管盖，12000rpm离心30秒。*确认在BufferWA中已经加入无水乙醇。*滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml离心管在纸巾上倒扣拍击一次。8.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入600µlB

7、ufferWB,盖上管盖，12000rpm离心30秒。*确认在BufferWB中已经加入无水乙醇。9.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，盖上管盖，14000rpm离心1分钟。*如果离心机的离心速度达不到14000rpm，则用最高速离心2分钟。*请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的PCR效果。10.弃2ml离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5ml离心管中，在纯化柱的膜中央加入100~200µl56℃温育的BufferTE，盖上管盖，室温静置1分钟，12000rpm离心30秒。*如果离心机没有

8、防泄漏的盖子，请将离心条件改为8000rpm离心30秒，以免管盖脱落而损伤离心机。*增加所加BufferTE的体积，能提高DNA的洗脱效率，但会降低DNA的浓度；减少所加Buff