SARI基因过表达对K562细胞系生物学影响

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1、中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2015;23(3):637－641·637·文章编号(ArticleID):1009－2137(2015)03－0637－05·论著·SAＲI基因过表达对K562细胞系生物学影响的研究122222222*王平，陈祥俊，郑金娥，杜雯，刘伟，张佳华，姚军霞，李小青，贺艳丽1华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科，湖北武汉430022;2华中科技大学同济医学院附属协和医院干细胞中心，湖北武汉430022摘要目的:通过构建SAＲI慢病毒表达载体，探讨SAＲI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响

2、。方法:采用ＲT-PCＲ方法获得目的基因并重组pLOV．CMV．GFP质粒，构建pLOV．CMV．GFP-SAＲI表达载体。通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后，获得阳性病毒颗粒，并以病毒颗粒感染K562细胞系。采用Q-PCＲ及Westernblot方法验证感染后K562细胞SAＲI基因转录和蛋白水平的表达情况，同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况，以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化。结果:利用ＲT-PCＲ方法获得SAＲI基因并成功构建了含SAＲI基因的慢病毒表达载体，从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比

3、，过表达SAＲI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加，而细胞周期无显著变化。结论:SAＲI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡，提示诱导SAＲI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用。关键词SAＲI;病毒感染;凋亡;增殖;CML中图分类号Ｒ733．7文献标识码Adoi:10．7534/j．issn．1009-2137．2015．03．007BiologicalEffectsoftheSAＲIOver-expressiononK562CellLine122222WANGPing，CHENXiang-Jun，ZHENGJin-E，DUWen，LIUW

4、ei，ZHANGJia-Hua，222*YAOJun-Xia，LIXiao-Qing，HEYan-Li1DepartmentofClinicalLaboratorialExamination，UnionHospital，TongjiMedicalcollege，HuazhongUniversityofScienceandTech-2nology，Wuhan430022，HubeiProvince，China;CenterforStemCellＲesearchandApplication，UnionHospital，TongjiMedicalcol-lege，Huazhon

5、gUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，HubeiProvince，China*CorrespondingAuthor:HEYan-Li，SupervisingTechnician．E-mail:heyanlicn@hust．edu．cnAbstractObjective:ToconstructalentivirusvectorcarryingSAＲIgeneandtoinvestigateitsbiologicaleffectsonK562cells．Methods:SAＲIwasamplifiedfromthepla

6、smidcontainingSAＲIcDNAandsubclonedintopLOV．CMV．eGFPvirusvector．Aftersequencing，lentiviruspackaging，titering，thevirusesofSAＲI-pLOV．CMV．eGFPwereharvestedandtansfectedintotheK562cells．Ｒeal-timequantitivePCＲandWesternblotwereperformedtovalidatetheSAＲIexpressionatthelevelofmＲNAandproteinrespec

7、tively．Simultaneously，theproliferation，apoptosisandcellcycleofK562cellsweredetectedbyCCK-8andflowcytometryrespectively．Ｒesults:TheSAＲIoverexpressedlentivirusvectorwassuccessfullyconstructed．ThemＲNAandproteinlevelsofSAＲIincreasedsignificantlyinthepLOV．CMV．eGFP-SAＲIgr