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时间:2019-05-21
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1、中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2015;23(3):637-641·637·文章编号(ArticleID):1009-2137(2015)03-0637-05·论著·SARI基因过表达对K562细胞系生物学影响的研究122222222*王平,陈祥俊,郑金娥,杜雯,刘伟,张佳华,姚军霞,李小青,贺艳丽1华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科,湖北武汉430022;2华中科技大学同济医学院附属协和医院干细胞中心,湖北武汉430022摘要目的:通过构建SARI慢病毒表达载体,探讨SARI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响
2、。方法:采用RT-PCR方法获得目的基因并重组pLOV.CMV.GFP质粒,构建pLOV.CMV.GFP-SARI表达载体。通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后,获得阳性病毒颗粒,并以病毒颗粒感染K562细胞系。采用Q-PCR及Westernblot方法验证感染后K562细胞SARI基因转录和蛋白水平的表达情况,同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况,以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化。结果:利用RT-PCR方法获得SARI基因并成功构建了含SARI基因的慢病毒表达载体,从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比
3、,过表达SARI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加,而细胞周期无显著变化。结论:SARI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,提示诱导SARI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用。关键词SARI;病毒感染;凋亡;增殖;CML中图分类号R733.7文献标识码Adoi:10.7534/j.issn.1009-2137.2015.03.007BiologicalEffectsoftheSARIOver-expressiononK562CellLine122222WANGPing,CHENXiang-Jun,ZHENGJin-E,DUWen,LIUW
4、ei,ZHANGJia-Hua,222*YAOJun-Xia,LIXiao-Qing,HEYan-Li1DepartmentofClinicalLaboratorialExamination,UnionHospital,TongjiMedicalcollege,HuazhongUniversityofScienceandTech-2nology,Wuhan430022,HubeiProvince,China;CenterforStemCellResearchandApplication,UnionHospital,TongjiMedicalcol-lege,Huazhon
5、gUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,HubeiProvince,China*CorrespondingAuthor:HEYan-Li,SupervisingTechnician.E-mail:heyanlicn@hust.edu.cnAbstractObjective:ToconstructalentivirusvectorcarryingSARIgeneandtoinvestigateitsbiologicaleffectsonK562cells.Methods:SARIwasamplifiedfromthepla
6、smidcontainingSARIcDNAandsubclonedintopLOV.CMV.eGFPvirusvector.Aftersequencing,lentiviruspackaging,titering,thevirusesofSARI-pLOV.CMV.eGFPwereharvestedandtansfectedintotheK562cells.Real-timequantitivePCRandWesternblotwereperformedtovalidatetheSARIexpressionatthelevelofmRNAandproteinrespec
7、tively.Simultaneously,theproliferation,apoptosisandcellcycleofK562cellsweredetectedbyCCK-8andflowcytometryrespectively.Results:TheSARIoverexpressedlentivirusvectorwassuccessfullyconstructed.ThemRNAandproteinlevelsofSARIincreasedsignificantlyinthepLOV.CMV.eGFP-SARIgr
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